主动吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路的影响

作     者：房栗 

作者单位：南京大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王文梅

授予年度：2016年

学科分类：1003[医学-口腔医学] 100302[医学-口腔临床医学] 10[医学] 

主      题：口腔黏膜 白斑 主动吸烟 动物模型 大鼠 上皮细胞 NOD1信号通路 

摘      要：第一部分构建经口主动吸烟动物模型[目的]吸烟对呼吸系统、消化系统、生殖系统、感官系统等多系统造成危害,可导致各种疾病的发生、发展。为了研究烟草与人类疾病的相关性,吸烟相关疾病模型的建立及完善越来越受到人们的关注,目前吸烟相关疾病模型主要包括临床样本吸烟模型、体外吸烟细胞模型和吸烟动物模型三类。但迄今为止,有关主动吸烟动物模型方面的研究鲜少,经口主动吸烟动物模型更未见国内外文献报道。本实验的目的是构建经口主动吸烟动物模型。[方法]Wistar大鼠20只,主动吸烟组和非吸烟组各10只,雌雄各半。主动吸烟组大鼠采用主动吸烟装置,建立大鼠经口主动吸烟模型。主动吸烟组大鼠每只连续经口吸烟3个月,每日两次,每次0.5小时。非吸烟组大鼠由经口装置吸空气,时间和频率与主动吸烟组相同。观察大鼠吸烟成瘾性、口腔黏膜外观的改变、神经行为学改变和体重的变化等。组化技术(HE染色)检查口腔黏膜的组织病理改变。[结果]主动吸烟组大鼠约2周时间吸烟成瘾,3个月时大体观可见口腔黏膜上皮颜色变为灰白色,质地粗糙,弹性降低。经统计学分析,体重较非吸烟组显著降低。口腔粘膜临床大体观及组织病理学检查显示,主动吸烟组大鼠口腔黏膜发生白斑,发生率为75%。[结论]本实验构建了经口主动吸烟动物(大鼠)模型,主动吸烟造成大鼠口腔黏膜大体和病理学改变,诱导口腔白斑的发生。第二部分 主动吸烟对大鼠口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路的影响[目的]口腔黏膜上皮细胞中NOD1信号通路是口腔黏膜固有免疫的重要组成部分,经本课题组前期体外实验和人体组织标本研究发现,吸烟可影响NOD1信号通路关键蛋白的表达,提示吸烟可抑制NOD1通路,降低口腔黏膜局部免疫。基于前期研究,本实验在构建经口主动吸烟动物模型的基础上,研究经口主动吸烟对口腔黏膜上皮细胞NOD1信号通路的影响。[方法]通过免疫印迹和免疫组化技术及图像分析法,对主动吸烟组与非吸烟组大鼠颊粘膜上皮细胞NOD1、RIP2、NF-κB、P-NF-κB (phospho-NF-κB,磷酸化NF-κB)蛋白表达进行检测,比较两组表达水平的差异。[结果]相对于非吸烟组,主动吸烟组NOD1和NF-κB的蛋白表达水平下降,RIP2、和P-NF-κB的蛋白表达水平上升。[结论]主动吸烟可导致口腔黏膜上皮细胞中NOD1信号通路中关键蛋白的改变,结果显示,主动吸烟对口腔黏膜上皮细胞中NOD1信号通路产生了影响。