抑制长链酰基辅酶A合成酶活性对COX-2调控HSC-T6增殖的影响

作     者：刘洁 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：阳学风

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：COX-2shRNA 肝星状细胞 增殖 Acsl 

摘      要：目的:研究抑制长链酰基辅酶A合成酶活性对COX-2调控HSC-T6增殖的影响。方法:1.体外培养HSCs-T6细胞,将构建好的p Yr-1.1COXshRNA转染至活化的HSCs-T6细胞中,在荧光显微镜下观察其转染效率。分组为a)空载体组(NC组):活化的HSCs-T6细胞+p Yr-1.1-HK;b)COX-2sh RNA组(KD组):活化的HSCs-T6细胞+p Yr-1.1-COX2sh RNA;c)NC+Acsl抑制剂组:活化的HSCs-T6细胞+p Yr-1.1-HK+Acsl抑制剂Triacsin C;d)KD+Acsl抑制剂组:活化的HSCs-T6细胞+p Yr-1.1-COX-2sh RNA+Acsl抑制剂Triacsin C。2.利用MTT法检测沉默COX-2对HSCs-T6的增殖情况。3.利用RT-PCR技术检测转染48h后各组HSCs-T6细胞内a-SMA、COX-2、Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5、Acsl6基因表达情况。结果:1.转染的HSCs-T6细胞内可见绿色荧光质粒,且转染率大于75%,说明质粒转染成功;2.与空载体组相比较,转染COX-2sh RNA质粒,48h后HSCs-T6细胞增殖率降低,且有统计学意义(P0.05);72h后的增殖率降低更明显,且有统计学意义(P0.05);3.a-SMA、COX-2、Acsl家族的Q-PCR法检测结果:与空载体组相比,COX-2sh RNA组a-SMA、COX-2表达降低,Acsl6 m RNA表达明显增强,Acsl其它亚型表达无统计学意义;与COX-2sh RNA组相比,COX-2sh RNA+Acsl抑制剂组a-SMA、COX-2表达增强,Acsl6 m RNA表达降低。***检测各组细胞活力结果:NC+Acsl抑制剂组与NC组、KD组相比较,促进HSCs-T6细胞的增殖;KD+Acsl抑制剂组与KD组比较,促进HSCs-T6细胞的增殖;KD+Acsl抑制剂组与NC+Acsl抑制剂组比较,HSCs-T6细胞的增殖抑制。结论:1.沉默COX-2可有效抑制HSC-T6增殖。2.抑制Acsl活性能逆转沉默COX-2对HSC-T6增殖的抑制作用,提示COX-2可能通过Acsl通路调控HSC-T6增殖。