酸浆提取物的体外降糖活性及其作用机制研究

作     者：胡小芳 

作者单位：湖北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙丽娟

授予年度：2016年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：酸浆 抗氧化活性 抗糖尿病活性 CYP2E1 GLUT4 

摘      要：糖尿病是一种严重危害人类健康的全球性疾病,是继心脑血管疾病、肿瘤之后的第三大非传染疾病。治疗糖尿病的药物很多,但大部分都存在毒副作用。因而寻找低毒高效的新型治疗糖尿病的药物,仍然是药物研究者的艰巨任务。酸浆作为一种药食同源的传统中药,富含黄酮、固醇类、生物碱类、酚酸类等多种化学成分,且具有止咳、利尿、抗氧化等作用,其降糖活性成分及其具体作用机制至今尚未完全阐明。本论文在体外活性筛选的指导下,运用HPLC-ESI-QTOF-MS法鉴定其活性成分,并在成熟的3T3-L1脂肪细胞和CYP2E1过表达的E47细胞水平上,进一步开展酸浆降糖作用机制的研究,主要包括以下三个方面的内容。1.利用75%的酒精分别回流提取酸浆的地上部分和果实部分,依次用石油醚和乙酸乙酯萃取,得地上石油醚相、地上乙酸乙酯相、地上水相、果实石油醚相、果实乙酸乙酯相和果实水相六个部位。然后分别检测各个部位的总抗氧化能力(FRAP)、清除ABTS自由基能力、总酚含量和抑制α-葡萄糖苷酶能力,以上活性筛选结果显示地上和果实的乙酸乙酯相较其他部位活性明显,并且地上乙酸乙酯相的效果优于果实乙酸乙酯相。2.运用HPLC-ESI-QTOF-MS法分析鉴定地上和果实的乙酸乙酯相的化学成分,结果显示酸浆的乙酸乙酯相主要含有黄酮、酚酸、苦味酸等成分,并且地上部分乙酸乙酯相的黄酮成分较果实乙酸乙酯相多,化学成分鉴定结果与以上活性筛选结果一致。3.在降糖作用机制方面,酸浆乙酸乙酯相能够有效缓解由H2O2诱导的3T3-L1细胞的氧化应激损伤和E47细胞中细胞色素P4502E1(CYP2E1)过表达导致氧化应激损伤,进一步研究发现酸浆乙酸乙酯相能够调节受氧化损伤的细胞中抗氧化酶的活性,即下调了活性氧(ROS)的含量、乳酸脱氢酶(LDH)的活性、丙二醛(MDA)的含量和上调过氧化氢酶(CAT)的活性。同时酸浆乙酸乙酯相能够呈浓度依赖性地降低CYP2E1 mRNA和蛋白的表达,上调葡萄糖转运子4(GLUT4)蛋白的表达。根据以上结果推测酸浆提取物可能通过抑制CYP2E1的表达,进而促进GLUT4的表达,从而发挥其降糖活性。综上所述,本论文主要研究了酸浆植物的降糖活性成分及其可能的作用机制,为将其开发成降糖靶向药物或膳食补充剂提供科学依据。