缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤时Bcl-2、GAP-43及Nogo-A变化影响的实验研究

作     者：钱芳 

作者单位：昆明医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李燕

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：脑缺血再灌注 缺血后适应 脑保护 生长相关蛋白-43 B细胞淋巴瘤/白血病-2基因 轴索过度生长抑制因子-A 

摘      要：目的： 采用线栓法制备大鼠脑缺血/再灌注模型,用缺血后适应（Ischemic postconditioning, IP）减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤,研究IP延长再灌注治疗时间窗的机制。通过检测Bcl-2、GAP-43及Nogo-A的变化特点,探讨IP是否通过增加Bcl-2. GAP-43的表达以及降低Nogo-A的表达对缺血再灌注后的脑组织发挥保护作用,从而验证IP对延长再灌注时间窗的作用机制,为临床指导缺血性脑梗死的治疗和诊断寻求新的理论基础。 方法： 1.采用线栓法制备大鼠脑缺血/再灌注模型。将20只成年健康雄性SD大鼠随机分成缺血2h再灌注组和缺血4.5h后适应组,每组分别为10只;于大鼠脑缺血/再灌注24h时进行神经功能评分;24h后行TTC染色测定脑梗死体积。 2.将30只成年健康雄性SD大鼠随机分成缺血2h再灌注组和缺血4.5h后适应组,每组分别为15只;于大鼠脑缺血再灌注24h后取脑组织,按相应步骤进行固定、石蜡包埋等制成石蜡切片,行HE染色,应用免疫组化法和Western blot检测Nogo-A、GAP-43和Bcl-2的表达水平。最后应用秩和检验、配对样本t检验等统计学方法进行数据分析以及观察脑组织的病理变化。 结果： （1）大鼠缺血4.5h后适应组脑梗塞体积较缺血2h再灌注组无明显差异。（2）缺血4.5h后适应组大鼠脑梗死体积、术后24hLudmila12分、Zea Longa5分、悬吊实验等神经功能评分均较缺血2h再灌注组无明显差异（P0.05）。（3）缺血4.5h后适应组Nogo-A、GAP-43和Bcl-2的变化符合正态分布,采用配对t检验,与缺血2h再灌注组有明显差异（P0.05）;行斜坡实验神经功能评分不符合正态分布,采用秩和检验,P=0.0030.05,两组间有显著差异。（4）缺血4.5h后适应组Nogo-A、GAP-43和Bcl-2的Western Blot （?）结果符合正态分布,但由于样本量不同,采用独立样本t检验,与缺血2h再灌注组有明显差异（P0.05）。 结论： （1）缺血后适应处理具有脑保护作用,可将再灌注时间窗延长至4.5h,为临床缺血性脑梗死溶栓治疗提供一种新的思路。（2）缺血4.5h后适应组对大鼠的Ludmila12分神经功能评分、Zea Longa5分神经功能评分、悬吊实验神经功能评分较缺血2h再灌注组无明显增加,说明缺血后适应能够改善神经功能损伤。（3）缺血4.5h后适应和缺血2h再灌注相比,大鼠脑梗死体积无明显增加,说明缺血后适应能够减小大鼠大脑中动脉栓塞造成的梗死体积。（4）IP能够增加再灌注24h梗死侧基底节脑缺血后GAP-43和Bcl-2的表达,降低再灌注24h梗死侧基底节脑缺血后Nogo-A的表达。（5）缺血4.5h后适应组脑梗死侧基底节GAP-43和Bcl-2阳性细胞计数和Western Blot （?）结果较缺血2h再灌注组相应部位的结果明显增加,缺血4.5h后适应组脑梗死侧基底节Nogo-A阳性细胞计数和VVestern Blot结果较缺血2h再灌注组相应部位结果明显减少,提示IP可以减少脑缺血神经元凋亡的发生,促进神经的再生,从而证实抑制神经元凋亡可能是缺血后适应发挥脑保护作用的一种机制。