小檗碱对人卵巢癌细胞IDO、AhR mRNA表达及IDO活性影响的研究

作     者：赵云平 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张国楠

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：上皮性卵巢癌 IDO AhR 小檗碱 

摘      要：研究背景与目的:卵巢癌是死亡率最高的女性生殖道恶性肿瘤,在过去的30年,卵巢癌5年生存率未得到明显提高。肿瘤诱导的免疫抑制是导致该类患者预后不良的主要因素之一,吲哚胺-2,3双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)是介导机体免疫抑制的关键因子,卵巢癌存在IDO高表达,抑制IDO表达和活性可期改善卵巢癌患者的免疫抑制,克服免疫抑制,进而改善预后。研究表明:小檗碱具有潜在的IDO活性抑制作用,但小檗碱能否下调卵巢癌IDO及其下游因子芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)mRNA的表达等问题尚缺乏研究。本实验将对小檗碱对人卵巢癌细胞IDO、AhR m RNA表达及IDO活性的影响进行研究。研究方法:1.利用结晶紫法检测小檗碱对人上皮性卵巢癌SKOV-3和A2780细胞的生长抑制作用;2.利用实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)检测不同浓度的小檗碱作用不同时间后SKOV-3和A2780细胞IDO、AhR mRNA的表达情况;3.利用比色法检测加药前后SKOV-3和A2780细胞上清色氨酸与犬尿氨酸浓度变化。实验结果:***-3细胞存在IDO高表达,A2780细胞不存在IDO高表达;2.小檗碱对SKOV-3和A2780细胞均有体外生长抑制作用(IC分别为2.48±0.269μmol/L和2.41±0.157μmol/L);3.小檗碱能显著抑制SKOV-3细胞IDO、AhR mRNA的表达,且抑制活性随着药物浓度增大、作用时间延长而增强,同时小檗碱浓度依赖性的降低SKOV-3细胞上清色氨酸的消耗以及犬尿氨酸的产量;4.小檗碱能显著抑制不存在IDO高表达的A2780细胞AhR mRNA的表达,同时小檗碱浓度依赖性的降低A2780细胞上清色氨酸的消耗以及犬尿氨酸的产量。结论:1.本研究发现A2780不存在IDO高表达,现有检索文献尚无相关报道;2.小檗碱下调AhR mRNA表达、减少卵巢癌细胞上清色氨酸消耗的作用,与IDO高表达与否无必然联系。3.小檗碱可改善卵巢癌免疫抑制状态,且对I型和II型卵巢癌可能都有效。