丹参素冰片酯对缺氧复氧诱导H9c2细胞损伤的保护作用及其机制研究

作     者：杨秋香 

作者单位：西北大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郑晓晖;李子健

授予年度：2015年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：丹参素冰片酯 缺氧复氧 H9c2 凋亡 活性氧簇 

摘      要：目的：随着介入治疗等方法的临床应用,部分患者的心肌结构和功能得到改善,但仍有一部分患者伴随心室重构等问题,甚至发生不可逆损伤。因此,研究新药候选化合物对缺血再灌注损伤的保护作用以及可能的机制在心血管类新药开发中具有重要的意义。丹参是我国的传统中药,具有心肌保护、扩张血管、抗动脉粥样硬化、抗血栓等药理作用,能够有效防治心血管疾病。目前,丹参的多种复方制剂已被用于临床治疗心血管疾病。我们课题组选取丹参重要活性成分之一丹参素和冰片拼合成一个新的化合物——丹参素冰片酯(DBZ)。前期研究发现,DBZ具有抗动脉粥样硬化、抗血栓形成及减少大鼠急性心肌梗死面积等多种药理作用。但是,DBZ对心肌细胞缺氧复氧损伤的作用还不清楚。因此本研究利用大鼠心肌细胞系H9c2细胞建立缺氧复氧损伤模型,探讨DBZ对缺氧复氧诱导H9c2细胞凋亡以及ROS产生的作用,并进一步研究其具体的机制。方法：培养H9c2心肌细胞,分成七组：空白对照组、缺氧复氧(Hypoxia/Reoxyge nation,H/R)组(24 h/6 h).DBZ1或DBZ2(0.1μmol/L)+H/R、DBZ1或DBZ2(1μmol/L) +H/R、DBZ1或DBZ2(10 μmol/L)+H/R、DBZ1或DBZ2(10 μmol/L)和二甲基亚砜组(DMSO,0.1%)。用浓度分别为0.1μmol/L、1 μmol/L和10μmol/L的DBZ1或DBZ2预处理30 min,于低糖低氧(1%O2)培养24 h,换高糖培养基复氧(21% O2)6 h。采用CCK-8方法考察DBZ1和DBZ2对H9c2细胞存活率的影响选择给药浓度,流式细胞仪检测H9c2的凋亡率;活性氧簇的探针(DCFH-DA)观察DBZ1和DBZ2对H/R诱导H9c2细胞产生ROS的影响;Elisa的方法检测caspase3和SOD的活性;Western blot检测cleaved-caspase3和NOX2、NOX4、SODl和SOD2表达。结果：(1)DBZ1和DBZ2剂量相关地抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡。(2)DBZ1和DBZ2剂量相关地抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡ROS产生。(3)DBZ1和DBZ2对ROS上游信号通路的影响主要通过抑制NOX2和NOX4的增加。结论：(1)DBZ1和DBZ2对H9c2细胞缺氧复氧损伤具有保护作用。(2)DBZ1和DBZ2通过减少ROS产生和抑制细胞凋亡发挥保护作用。(3)旋光异构体DBZ1和DBZ2的心肌保护作用没有明显差异。