抗病基因PAP及GO转化嘎啦苹果的研究

作     者：洪小娟 

作者单位：西北农林科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张军科

授予年度：2009年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

主      题：苹果 PAP基因 GO基因 根癌农杆菌介导 基因枪介导 

摘      要：苹果是我国重要的果树之一,真菌病和病毒病是影响苹果品质和产量的重要限制因素,抗病育种是解决这一问题的根本途径。由于苹果在遗传上高度杂合,传统的杂交育种手段选育抗病品种难度极大且育种周期较长,现代基因工程育种技术为转基因定向改良苹果抗病性提供了可能。本研究以抗病基因GO和抗病毒基因PAP为目的基因,研究了农杆菌介导法和基因枪法转基因定向改良嘎拉苹果抗病性。主要研究结果如下: 1优化了嘎啦苹果叶片遗传转化体系,利用农杆菌介导法将美洲商陆抗病毒蛋白（PAP）基因转入嘎啦苹果。研究表明叶片经过3 d的预培养,于OD600值为0.6的菌液中侵染10 min,3 d共培养,抑菌素Cef的浓度为250 mg/L,庆大霉素筛选压力为50 mg/L的条件下,转化效率最高。通过根癌农杆菌介导转化,获得了抗性植株,经初步鉴定其中2株为转化植株。 2构建了菠菜乙醇酸氧化酶基因的植物表达双元载体pBinGO,并将其导入根癌农杆菌EHA105中。 3以嘎啦苹果叶片为受体材料,利用基因枪介导法进行GO基因的遗传转化。初步确立了嘎啦苹果基因枪遗传转化的物理参数:金粉微粒大小为1.0 um,氦气压力为1100spi,真空度为27 inchHg,轰击距离为6 cm时转化效率最高;苹果待转化叶片在高渗培养基中经过4 h的预处理,基因枪转化后在分化培养基中进行2-3 d的恢复培养,然后在筛选培养基中进行筛选,转化效率较高;经基因枪法转化获得了抗性植株。为今后基因枪法在苹果遗传转化中的应用提供了方法依据。