吉林地区猪萎缩性鼻炎病原分离鉴定及环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶治疗效果研究

作     者：郑艳利 

作者单位：吉林农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：高云航

授予年度：2013年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：猪萎缩性鼻炎 分离鉴定 药敏试验 壳聚糖温敏性水凝胶 

摘      要：猪萎缩性鼻炎(Swine infectious atrophic rhinitis, AR)又称传染性萎缩鼻炎或慢性萎缩性鼻炎,是由产毒素多杀性巴氏杆菌(Pateurella multocida, Pm)和／或支气管败血型波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica, Bb)引起猪的一种慢性呼吸道疾病。临床上主要以打喷嚏、流鼻涕、慢性鼻炎、呼吸不畅、颜面变形、鼻甲骨萎缩、眼角下方有泪斑和生长缓慢为特征。临床上广泛使用AR疫苗和各种抗生素进行猪传染性萎缩鼻炎的预防和治疗,但由于菌株血清型较多、疫苗质量参差不齐、免疫程序不尽合理、猪群健康状况各异、病原耐药性产生等原因,导致各地AR感染情况均较为严重且防控效果不佳。随着致病菌耐药性对公共健康造成的严重威胁以及人类对动物性食品抗生素残留的问题日益重视,寻找一种对AR敏感、低毒且给药方便的有效药物己迫在眉睫。 壳聚糖温敏性水凝胶(Thermosensitive hydrog)能够感受外界环境温度的变化而发生溶胶-凝胶转变(sol-gel transformation),现已广泛应用于药物释放系统的研究。其在低温下呈可流动状态,溶胶内可包载药物;当温度升至机体正常温度时,壳聚糖呈不可流动的凝固态,当喷涂到动物体表后呈胶状,可以作为药物缓释载体。因此,本试验充分利用壳聚糖水凝胶这一特性,首先从吉林省某些发病猪场采集疑似AR感染病猪鼻腔分泌物,按照常规方法进行病原分离鉴定与药物敏感性试验,确定临床敏感药物,并以壳聚糖温敏性水凝胶为载体,制备环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶,观察其对患AR病猪的治疗效果。 1猪萎缩性鼻炎病原分离鉴定及药物敏感性试验 对吉林省部分疑似AR发病猪场进行病料采集,通过病原分离、形态观察、生化鉴定、致病性试验,初步获得病原菌10株,其中产毒素多杀性巴氏杆菌5株和支气管败血波氏杆菌5株。根据致病性试验结果,采用16S rDNA方法对分离株Pml和Bbl进行细菌遗传学鉴定,分别将分离株Pml和Bbl基因序列在NCBI上进行BLSAT比对分析,结果表明,Pml和Bbl与猪源巴氏杆菌和波氏杆菌同源性分别高达92%～94%、95%。采用试管-平板二倍稀释法测定产毒素多杀性巴氏杆菌Pml-5和支气管败血波氏杆菌Bbl-5对9种临床常用抗生素的MIC值,结果表明,所有菌株对青霉素、链霉素、新诺明、阿莫西林高度耐药(MIC≥512μg/mL);部分菌株对强力霉素、氟苯尼考较耐药(MIC≥32μg/mL);所有菌株对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星敏感(MIC≤0.5μg/mL)。 2环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶的制备及临床应用效果观察 采用离子交换法制备载环丙沙星粒子,以壳聚糖／聚乙烯醇温敏性水凝胶为载体,制备环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶。凝胶时间和安全性检测发现环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶在低温下呈可流动的液态,当温度升至与机体温度相似时变成不可流动的凝胶态,表明环丙沙星制备的温敏性水凝胶符合试验要求。对患传染性萎缩鼻炎的病猪进行分组喷雾治疗结果显示,环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶治疗效果明显优于环丙沙星水溶液组,而壳聚糖温敏性水凝胶和生理盐水对照组几乎无任何治疗作用。研究结果表明,环丙沙星壳聚糖温敏性水凝胶具有良好和治疗效果和药物缓释能力。