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耐低温酵母的分离鉴定及对低温酿造米酒品质的影响

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食品工业科技 2024年第7期45卷 159-166页

作者：廖娟李嘉宇黄杰惠陈博慧杨涛中南林业科技大学食品科学与工程学院湖南长沙410004 稻谷及副产品国家工程研究中心湖南长沙410004

为筛选适合低温酿造米酒的酵母菌株,本研究从米曲中分离纯化、筛选出低温下产香舒适、发酵能力优良、产酒精能力和产酯能力强的酵母,通过形态观察及分子生物学方法对其进行菌种鉴定,分析其生长情况和耐受性,并将其应用于低温酿造米酒。... 详细信息

为筛选适合低温酿造米酒的酵母菌株,本研究从米曲中分离纯化、筛选出低温下产香舒适、发酵能力优良、产酒精能力和产酯能力强的酵母,通过形态观察及分子生物学方法对其进行菌种鉴定,分析其生长情况和耐受性,并将其应用于低温酿造米酒。结果表明,分离、筛选得到一株耐低温酵母菌株XQ2-8,经鉴定为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。与对照菌株相比,菌株XQ2-8在15℃下生长曲线的延滞期变短、达到稳定期时的生物量更高,具有较好的耐低温特性。菌株XQ2-8对生长环境具有一定的耐受性,可在乙醇体积分数8%vol、葡萄糖含量60%、pH3.0、低温10℃条件下正常生长。利用菌株XQ2-8酿造米酒,与常温酿造相比,低温米酒的总酯含量(60.08 mg/L)和甘油含量(2.59 g/L)分别提高了15.6%、22.7%;总酸含量(1.91 g/L)和总高级醇含量(578.20 mg/L)分别降低了18.0%、17.7%;感官得分(89.47)提高了11.7%。说明利用筛选得到的菌株XQ2-8低温酿造可以改善米酒中酯类含量低、高级醇含量偏高的问题,提高米酒品质。

关键词：米酒酵母菌分离鉴定生长特性低温发酵

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一株马冠状病毒的分离鉴定及遗传演化分析

微生物学报 2024年第5期64卷 1483-1493页

作者：景然张梦佳张梦迪朱文龙赵珊李文涛华中农业大学动物医学学院湖北武汉430070 华中农业大学农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室湖北武汉430070 四川农业大学动物医学院四川成都611130 华中农业大学动物疫病诊断中心湖北武汉430070 湖北洪山实验室湖北武汉430070

马冠状病毒病是由马冠状病毒(equine coronavirus,ECoV)引起的一种马新发胃肠道病毒病,成年马感染后主要出现发烧、腹痛和腹泻等症状。1975年,马冠状病毒感染首次在美国出现,此后在多个国家和地区均有流行,此前我国仅从山东腹泻驴的小... 详细信息

马冠状病毒病是由马冠状病毒(equine coronavirus,ECoV)引起的一种马新发胃肠道病毒病,成年马感染后主要出现发烧、腹痛和腹泻等症状。1975年,马冠状病毒感染首次在美国出现,此后在多个国家和地区均有流行,此前我国仅从山东腹泻驴的小肠样品中分离得到了一株重组马冠状病毒。【目的】了解ECoV中国毒株的基因组成、亲缘关系以及生物学特性,可以为我国ECoV流行现状和遗传演化趋势提供依据,为ECoV防控产品的研发提供材料。【方法】对湖北省武汉市黄陂区腹泻马匹的粪便样品进行RT-PCR检测,对检测阳性样品进行病毒分离,并利用靶向ECoV S1蛋白的单克隆抗体通过间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)对分离的病毒进行验证。根据ECoV-JL株全基因组测序结果,对全基因组、N基因和NS2基因进行了基因组系统发育分析和同源性比较。【结果】成功分离到一株ECoV,并命名为ECoV-JL。透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)观察分离到的病毒颗粒呈球状,且具有囊膜和冠状病毒典型的纤突结构。该分离株感染HRT-18细胞72 h后病毒滴度可到达峰值,半数组织培养感染剂量(tissue culture infectious dose 50%,TCID50)约为106.16TCID50/mL。ECoV-JL毒株可以在人回盲肠癌(human ileocecal cancer-18,HRT-18)细胞、人结直肠腺癌(human colorectal adenocarcinoma-2,Caco-2)细胞和人肝癌(human liver cancer cells,Huh7)细胞上稳定传代。ECoV-JL株与GenBank中现有的ECoV全基因组序列相似性为97.9%-99.0%,系统发育分析发现ECoV-JL株属于单独的演化分支,与其他毒株的亲缘关系较远,说明ECoV-JL株可能是重组变异而来,其中NS2基因突变较多,NS2基因编码的差异是造成ECoV-JL株与其他毒株同源性较差的主要原因。【结论】本研究从腹泻马的粪便样品中成功分离并鉴定了一株ECoV,将其命名为ECoV-JL株,对该毒株生物学特性和亲缘关系的研究反映了湖北地区流行毒株的特点,为我国ECoV流行现状和演化趋势提供重要依据。

关键词：马冠状病毒分离鉴定遗传演化分析

患病异育银鲫中嗜冷黄杆菌的分离鉴定及组织病理学观察

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水产学报 2024年第5期48卷 94-106页

作者：姜虎成李润波赵彦华徐晓雁孙梦玲夏爱军薛晖江苏省淡水水产研究所上海海洋大学农业农村部淡水水产种质资源重点实验室

为确定越冬期内江苏多地异育银鲫暴发性死亡的原因，本研究利用高通量测序比较了健康样品和患病样品的微生物群落多样性和结构组成的差异，分析了异育银鲫病害暴发过程中的细菌类型及特性。结果显示，在属水平上，患病样品中黄杆菌属丰... 详细信息

为确定越冬期内江苏多地异育银鲫暴发性死亡的原因，本研究利用高通量测序比较了健康样品和患病样品的微生物群落多样性和结构组成的差异，分析了异育银鲫病害暴发过程中的细菌类型及特性。结果显示，在属水平上，患病样品中黄杆菌属丰度最高。在种水平上，患病样品中嗜冷黄杆菌的丰度最高，分别达到63.01%和61.31%，显著高于健康组的1.55%。根据微生物群落特征分析结果，从患病样品体表的病灶处分离出优势病原菌NJ01，通过细菌形态学、生理生化分析、16S rDNA序列比对确定NJ01菌株为嗜冷黄杆菌。人工感染NJ01菌株14 d后，1.7×10～6和1.7×10～7 CFU/mL两组的死亡率达到100%，感染症状和自然发病症状一致。组织病理学观察发现，病鱼的肌细胞坏死，间质中充满了淋巴细胞；肝脏中细胞溶解坏死，细胞核消融；在脾脏中发现脾细胞散在坏死，伴随着充血的症状；肾小管上皮脱落，肾间质存在大量淋巴细胞。药物敏感实验结果显示，NJ01菌株对头孢西叮、头孢哌酮、庆大霉素和克拉霉素等敏感。研究表明，优势菌NJ01是致病菌，可通过扰乱机体正常的免疫和代谢功能导致疾病的发生。本研究首次报道了嗜冷黄杆菌在异育银鲫中的致病性，这将为大宗淡水鱼“越冬综合征”的药物防治及其致病机理研究提供参考依据。

关键词：异育银鲫嗜冷黄杆菌扩增子分析分离鉴定致病性耐药性

中华鳖源按蚊伊丽莎白菌的分离鉴定及药敏特性研究

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水生生物学报 2024年第4期48卷 683-693页

作者：王玉柱蒋巍巍刘文舒路晶晶唐艳强肖海红郭小泽李思明江西省农业科学院畜牧兽医研究所南昌330200 四川农业大学动物科技学院成都611130

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究。在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆... 详细信息

研究对从江西省抚州市南丰县某中华鳖养殖基地患病中华鳖(Trionyx sinensis)组织中分离培养得到的一株按蚊伊丽莎白菌(Elizabethkingia anophelis)疑似菌株进行鉴定和药敏特性研究。在无菌环境中解剖患病中华鳖得到肝脏、脾脏组织,匀浆后接种在LB培养基上,分离得到优势菌株EJX2021。对该菌株进行形态学观察、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定以鉴定菌株种类;进行人工回归感染、组织病理学观察、毒力因子分析和抗生素药物敏感性试验研究其致病能力和药物敏感性特征。从患病中华鳖中分离出一株优势菌株EJX2021,结合其表型特征、16S RNA基因序列测定和生理生化鉴定,确定其为按蚊伊丽莎白菌。在人工回归感染后,该菌株对中华鳖15d的LD50为1.62×10^(8)CFU/mL,95%置信区间为(0.78—3.37)×10^(8)CFU/mL;组织病理学观察肠道、肺脏、脾脏、肝脏等组织出现不同程度病变。毒力因子分析显示该菌株包含246个潜在毒力基因。药物敏感性试验显示该菌株为多重耐药菌株,对多西环素、米诺环素、卡那霉素、哌拉西林、恩诺沙星、氟苯尼考敏感,对头孢曲松、头孢哌酮中度敏感,对新霉素等15种抗生素具有耐药性。研究证明了按蚊伊丽莎白菌是能够导致中华鳖病害的一种病原菌,为该细菌导致中华鳖病害的检测、鉴别和防治提供科学依据。

关键词：按蚊伊丽莎白菌分离鉴定药敏特性中华鳖

牦牛源短小芽胞杆菌TS1的分离鉴定及其生物学特性研究

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南京农业大学学报 2024年第1期47卷 69-77页

作者：刘银坤李昊李子昕李知新张玉彦李文财任建军唐姝南京农业大学动物医学院江苏南京210095 宁夏动物疾病预防控制中心宁夏银川750199 宁夏安利森生物科技有限公司宁夏银川750001

[目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名:TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性,初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 ... 详细信息

[目的]本试验旨在研究一株牦牛源短小芽孢杆菌(命名:TS1)的分离鉴定、抗逆性、对常用抗菌药物的耐药性以及对常见致病菌的抑菌活性,初步探索其作为益生菌添加剂在畜牧养殖中应用的可行性。[方法]对健康牦牛新鲜粪便进行100℃水浴处理10 min以筛选具有抗逆性的芽胞杆菌,进行形态学、生理生化特征及16S rRNA序列分析鉴定,通过测量生长曲线、耐酸、耐胆盐试验、药敏试验及抑菌试验等方法对其生物学特性进行研究,通过全基因测序分析其可能产生抗菌物质的类型。[结果]TS1为短小芽胞杆菌且具有耐酸、耐胆盐生长特性;TS1对于12种常见的抗菌药物敏感,且对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌具有抑菌作用。测序分析显示该菌株可编码与Amylocyclicin同源性达48.90%的一种新型抗菌肽,进而发挥其抗菌活性。[结论]短小芽胞杆菌TS1有一定的抗逆性和潜在的益生能力及广谱抗菌效果,并且在畜禽肠道微生物系统中对抗生素耐药性传递的风险较低,适合作为益生菌添加剂类抗生素替代产品。

关键词：短小芽胞杆菌分离鉴定抑菌抗生素替代品益生菌添加剂

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黄瓜枯萎病菌共生细菌的分离鉴定及功能分析

园艺学报 2024年第3期51卷 643-655页

作者：刘梦贾惠婷周新刚东北农业大学园艺园林学院哈尔滨150030

以黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerium)为研究对象,利用荧光核酸染色技术和电子显微镜确定了菌丝外部及内部存在共生细菌;用平板培养法成功分离出共生细菌,并通过16S rDNA测序对菌株进行鉴定,确定分离菌株属于无色杆菌... 详细信息

以黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerium)为研究对象,利用荧光核酸染色技术和电子显微镜确定了菌丝外部及内部存在共生细菌;用平板培养法成功分离出共生细菌,并通过16S rDNA测序对菌株进行鉴定,确定分离菌株属于无色杆菌属(Achromobacter spp.);碳源利用分析表明,与无共生细菌相比,存在共生细菌的黄瓜枯萎病菌的Shannon指数和反Simpson指数分别显著增加了2.18%和1.67%,且对糖类、羧酸类、胺类、聚合物和其他碳源的利用能力较强,但对氨基酸类物质的利用能力较弱。研究结果明确了黄瓜枯萎病菌存在无色杆菌属的共生细菌,并且共生细菌会影响宿主真菌的生长和代谢能力。

关键词：黄瓜黄瓜枯萎病菌共生细菌分离鉴定碳源利用

一株耐铬细菌的分离鉴定及其对Cr(Ⅵ)的抗性

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化学工程 2024年第2期52卷 12-16,49页

作者：胡振华王祥宝王炳源陆洪省隋业伟张翠静山东科技大学安全与环境工程学院山东青岛266590 兖州区乡村振兴事务中心山东济宁272000

从山东省某含铬农田土壤取样进行宏基因测序、16SrDNA以及构建系统树等方法分离、鉴定耐铬细菌,并通过扫描电子显微镜等研究其对Cr(Ⅵ)的抗性。某含铬农田土壤中的优势菌为Enterobacter cloacae(阴沟肠杆菌),将其命名为Enterobacter clo... 详细信息

从山东省某含铬农田土壤取样进行宏基因测序、16SrDNA以及构建系统树等方法分离、鉴定耐铬细菌,并通过扫描电子显微镜等研究其对Cr(Ⅵ)的抗性。某含铬农田土壤中的优势菌为Enterobacter cloacae(阴沟肠杆菌),将其命名为Enterobacter cloacae SD。SD的Cr(Ⅵ)耐受质量浓度可达3 200 mg/L;在150 mg/L Cr(Ⅵ)中培养时,菌落较不加Cr(Ⅵ)时少且分散,但单菌落较大;SD细胞表面粗糙,似有沉淀物产生。以酵母浸粉为碳源,pH值为7,培养温度为30℃时菌株SD可较好生长。在150 mg/L Cr(Ⅵ)下,SD对Cr(Ⅵ)的去除率为39.67%。研究表明Enterobacter cloacae SD可耐受高质量浓度Cr(Ⅵ)的同时,对Cr(Ⅵ)有一定的去除能力,这为Cr(Ⅵ)污染的微生物修复提供了可能的菌种资源。

关键词：铬污染分离鉴定阴沟肠杆菌 Cr(Ⅵ) 微生物修复

广西地区美国牛蛙源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定、耐药性及组织病理

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水产学报 2024年第5期48卷 118-130页

作者：肖双燕韦冬冬刘明珠黄静余庆蒙兰丽李鹏飞广西科学院广西海洋科学院广西水产生物技术与现代生态养殖重点实验室广西壮族自治区渔业重大疫病防控与高效健康养殖产业技术工程研究中心广西海洋科学院北部湾海洋产业研究院中国-东盟现代渔业产业技术转移示范中心田东县水产技术推广站

为了探明2022年5月在广西南宁某养殖基地引起美国牛蛙暴发疾病的原因，本实验从患病美国牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏和肠道中分离出优势菌，采用形态学观察、生理生化实验、16S r RNA基因序列测定及系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的... 详细信息

为了探明2022年5月在广西南宁某养殖基地引起美国牛蛙暴发疾病的原因，本实验从患病美国牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏和肠道中分离出优势菌，采用形态学观察、生理生化实验、16S r RNA基因序列测定及系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理，对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、药物敏感性实验以及耐药基因检测。结果显示，在患病濒死美国牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏以及肠道均分离到单一的优势菌株，从肠道分离得到的一株优势菌被命名为NFCF-02，并经鉴定为弗氏柠檬酸杆菌。该菌株携带viaB、ompX、ureE、ureD、ureG和ureF等6种毒力基因，对美国牛蛙的半数致死浓度为3.12×10～6 CFU/mL，发病临床症状包括肝脏变黄、花肝、肝脏坏死；肾脏充血发红、胃表面有血丝以及肠道呈红色和充血。组织病理学观察发现，其肝细胞变性坏死，肝索排列紊乱；肾小管上皮细胞肿胀坏死、严重区域肾小管崩解、坏死；脾脏中央静脉扩张淤血，含铁血黄素、色素细胞增多；肠黏膜脱落，肠上皮细胞坏死脱落，杯状细胞坏死。药敏实验结果显示，分离菌株NFCF-02对新霉素、多黏菌素B、头孢拉定、多西环素等4种抗菌药物敏感，对林可霉素等14种抗菌药物已产生耐药性，携带gyrA、Sul1等7种耐药基因。研究表明，弗氏柠檬酸杆菌对美国牛蛙具有高致病性，可引起美国牛蛙肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤，最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次从组织病理学分析和毒力因子携带情况的角度确定了弗氏柠檬酸杆菌对美国牛蛙的致病力，为养殖美国牛蛙中弗氏柠檬酸杆菌病的诊断和药物防控提供了参考依据。

关键词：美国牛蛙弗氏柠檬酸杆菌分离鉴定组织病理分析毒力因子耐药性

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橄榄仁抗氧化肽的分离鉴定及分子对接

食品与发酵工业 2024年第5期50卷 189-198页

作者：张迎阳董亚云邹平郑文武常州大学药学院/生物与食品工程学院江苏常州213164

该研究利用酶解法结合凝胶色谱柱从橄榄仁中分离纯化得到6个抗氧化肽,采用分子对接模拟6种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的结合机制。采用酶解法从橄榄仁中提取抗氧化活性肽,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,... 详细信息

该研究利用酶解法结合凝胶色谱柱从橄榄仁中分离纯化得到6个抗氧化肽,采用分子对接模拟6种抗氧化肽与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的结合机制。采用酶解法从橄榄仁中提取抗氧化活性肽,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,从6种商用酶中筛选出最适蛋白酶为木瓜蛋白酶,以底物浓度、酶底比、酶解时间、温度进行单因素试验,选取影响酶解反应的3个因素(酶底比>温度>时间)进行响应面法优化得出最佳工艺条件为底物质量浓度50 g/L、酶底比为3.3%(质量分数)、温度20℃、时间88 min。对最优条件下的粗肽液进行SephadexG-25和SephadexG-15分离纯化得到6个具有良好活性的抗氧化肽,分别为WLSF、TSVLR、LVYLVR、AGGKPFQ、YYPFKGFA、AFNVDERLAR。TSVLR显示出最高的DPPH自由基清除活性81.07%和羟自由基清除能力42.48%。分子对接研究表明,纯化的肽通过疏水效应和氢键与抗氧化相关的关键蛋白SOD有效结合。结果表明,橄榄仁可作为天然食物来源制取功能性食品的一个新的探究方向。

关键词：橄榄仁抗氧化肽响应面优化分离鉴定分子对接