益气化瘀清热方及其拆方对IgA肾病大鼠生化、肾组织病理及其表达Nephrin、Podocin蛋白的影响

作     者：赵永旺 

作者单位：河南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：翟文生

授予年度：2016年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：IgAN 益气化瘀清热方 nephrin podocin 

摘      要：目的:通过把益气化瘀清热方及其拆方作用于实验性IgAN模型大鼠,观察实验中各组大鼠的尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量、血生化指标、肾脏病理的变化情况,以及观察nephrin、podocin蛋白在肾小球足细胞的分布及量的变化,探讨益气化瘀清热方及其拆方对IgAN的作用机理。方法:以SPF级雄性Wistar大鼠作为实验研究载体,将它们采用随机分组法分为11组:空白组、模型组、益气组、化瘀组、清热组、复方组、雷公藤多苷组(GTW组)、高剂量益气组(益高组)、高剂量化瘀组(化高组)、高剂量清热组(清高组)、高剂量复方组(复高组)。采用牛血清白蛋白(BSA)灌胃400mg/kg两天一次,持续8周,颈部皮肤下注射四氯化碳(CCL)0.1ml+蓖麻油0.3ml每周一次,持续9周,第6周经尾静脉注射脂多糖(LPS)0.25mg/kg的实验方法制作IgAN模型。实验中观察各组大鼠尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量、血生化及肾脏病理情况。同时运用免疫组织化学染色方法观察nephrin、podocin蛋白在肾小球组织足细胞中的表达及染色强度,并对检测结果进行半定量图像分析。结果:1在尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量方面1.1从第6周末开始,模型组大鼠开始出现血尿、蛋白尿,并且呈现持续进展,但未出现肉眼血尿。1.2在第10周时,GTW组、复高组尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量与模型组比较明显下降,有显著差异(P0.05)。1.3第12周末时,各治疗组尿红细胞计数、24小时尿蛋白定量与模型组比较均显著降低,有显著性差异(P0.05)。GTW组大鼠在12周时ALT、AST数值与其它各干预组大鼠之间比较明显升高,差异有统计学意义;其它各组间三个不同时间点ALT、AST无明显差异。说明在复制该模型中,各实验大鼠的ALB、TP、TCH、TG、Cr、BUN水平均暂未受到影响;雷公藤多苷对实验大鼠肝功能有一定的影响。3在肾脏病理方面IgAN模型组大鼠肾小球体积略增大,系膜细胞轻度至中度增生,伴有系膜基质轻度到中度增宽;病理表现以Ⅱ至Ⅲ级病变为主。免疫荧光镜下可以看见肾小球系膜区和毛细血管壁有较强的颗粒状或团块状Ig A复合物沉积,荧光强度以(+++)为主。各治疗组中,益气组肾脏病理表现同模型组,病理表现以Ⅱ至Ⅲ级病变为主,荧光强度以(+++)为主。其余各组大鼠病理病变程度均较模型组减轻,多数表现为系膜细胞轻度增生,伴系膜基质轻度增宽;病理病变程度以Ⅰ级和Ⅱ级病变为主。在免疫荧光镜下可以看到肾小球系膜区的Ig A表达强度较模型组明显减弱,荧光强度以(+)为主。4在nephrin、podocin蛋白表达方面在干预IgAN大鼠肾组织nephrin、podocin蛋白表达方面,复高组作用最强,益气组作用最弱,复方组作用优于化瘀组和清热组,化瘀组和清热组作用优于益气组,复高组作用优于化高组和清高组,化高组和清高组作用优于益高组,各组药物高剂量作用强于低剂量。结论:(1)益气化瘀清热方及其拆方能够较明显改善实验中IgAN大鼠血尿、蛋白尿及肾脏病理情况,其中益气组作用最差,复高组作用最强,复方组、化瘀组、清热组整体作用优于益气组,高剂量组作用优于低剂量组。(2)益气化瘀清热方及其拆方对IgAN大鼠血尿、蛋白尿、肾脏病理情况的改善,其干预机制很可能是通过调节足细胞相关分子nephrin和podocin蛋白的表达来实现的。(3)复高组作用出现时间早,效果好,副作用少,值得临床推广。