靶向左氧氟沙星脂质体的制备及其抗耐药菌作用的研究

作     者：樊菊香 

作者单位：东南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴国球

授予年度：2015年

学科分类：100702[医学-药剂学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：抗菌肽 左氧氟沙星 脂质体 耐药菌 靶向性 

摘      要：目的：在前期抗菌肽研究的基础上,结合纳米脂质体技术,用抗菌肽Ts修饰脂质体表面制备具有靶向抗耐药菌作用的左氧氟沙星脂质体,优化其制备工艺和处方,并考察其体外抗菌活性。方法：1、选择紫外分光光度法测定左氧氟沙星的含量,确定检测波长,并进行方法学考察,采用透析法对靶向左氧氟沙星脂质体的包封率进行测定,考察其回收率;2、以包封率为评价指标,分别采用了pH梯度法和硫酸铵梯度法制备左氧氟沙星脂质体,筛选脂质体制备方法;以单因素优化法选择最佳的制备工艺,采用正交试验设计对左氧氟沙星脂质体制备处方进行优化;其后用具有靶向作用的Ts修饰脂质体,制备靶向左氧氟沙星脂质体;并对最优条件下制备的靶向左氧氟沙星脂质体进行理化性质和初步稳定性的考察;3、通过激光共聚焦显微镜观察香豆素标记的靶向左氧氟沙星脂质体对标准肺炎克雷伯菌株的靶向性;测定游离左氧氟沙星、左氧氟沙星与Ts联合、非靶向及靶向左氧氟沙星脂质体对耐药菌株的MIC,并分析协同效应;通过检测对肺炎克雷伯标准菌株的时间杀菌活性,药物摄取实验评价靶向左氧氟沙星脂质体的体外抗菌活性;通过结晶紫染色和扫描电镜观察靶向左氧氟沙星脂质体对生物膜形成的影响。结果：紫外分光光度法测定脂质体中左氧氟沙星的含量,290 nm波长处有最大吸收峰,辅料无干扰,方法简便、灵敏,专属性高;选用透析法测定脂质体的包封率,简便易行,可以将脂质体与游离药物有效的分离,回收率高。硫酸铵梯度法制备左氧氟沙星脂质体优于pH梯度法;硫酸铵梯度法最佳制备工艺条件为：硫酸铵浓度0.2 mol/L,透析24h形成硫酸铵梯度,孵育载药温度60℃,孵育载药20 min;最佳处方为：磷脂浓度为30mg/mL,磷脂与胆固醇质量比为4：1,药脂质量比为1：10;采用最佳制备工艺和处方平行制备3批靶向左氧氟沙星脂质体,平均包封率为75.26士1.35%,Ts偶联率为68.43±1.45%,平均粒径为152.5±3.2 nm,多分散指数(PDI)为0.149±0.02,与非靶向脂质体基本无差异,zeta电位+20.68±1.72 mV,工艺重现性良好,一个月内稳定性良好。靶向脂质体MIC值均低于其他剂型,FIC≤0.5,显示协同效应;在同一时间内抑菌数量最多,时间杀菌效果显著;细菌细胞内左氧氟沙星的累积量最大;靶向脂质体对生物膜的抑制作用强于单独Ts作用。结论：本课题采用硫酸铵梯度法成功研制了靶向左氧氟沙星脂质体,制备工艺简便易行,包封率高,重现性好,性质稳定;相对游离剂型和非靶向脂质体,靶向左氧氟沙星脂质体对耐药菌具备更强的抗菌活性,从而可提高疗效,降低药物使用剂量,为临床开发和应用提供了一定的理论基础。