砂烫与盐烫骨碎补的炮制工艺比较研究

作     者：李静 

作者单位：湖南中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋孟良

授予年度：2009年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：骨碎补 炮制 砂烫 盐烫 柚皮苷 总黄酮 

摘      要：目的：骨碎补是水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze) J. Sm.的干燥根茎,从古籍的记载到《中国药典》的收载,骨碎补的传统炮制方法历来采用砂烫,以油砂作为传热中间体。但该方法存在没有考虑辅料炮制的作用、油烟熏、灰尘影响环境、消耗大等缺点。而有关古籍也记载了盐制的炮制方法,根据中医理论,咸入肾经,盐既可作为一种传热媒介又可增强骨碎补的补肾之功效。因此,我们考虑骨碎补的炮制以盐烫代替砂烫,故采用现代科学手段,选择柚皮苷、总黄酮、煎出物量、收率、膨胀率、酥脆度(硬度)、去毛情况、形态、色泽、NaCl含量等作为评价指标,对骨碎补砂烫工艺与盐烫工艺进行比较研究。 方法：(1)评价指标的建立：采用高效液相色谱法(HPLC法)测定骨碎补饮片及提取液中的柚皮苷含量,并进行了方法学考察。测定方法为：Waters公司液相色谱仪,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-醋酸-H2O(40：3：60)为流动相,检测波长：283nm,流速：1.00mL/min,柱温：25℃,理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000,进样量10μL。采用紫外分光光度法(UV法)测定骨碎补饮片及提取液中的总黄酮含量,并进行了方法学考察。测定方法为：采用UV-2450紫外分光光度计(日本岛津),以柚皮苷为对照,检测波长：283nm。采用烘干法测定煎出物量,采用体积法测定膨胀率,采用《中国药典》2005版第一部附录IXH水分测定法中的第一法测定炮制品水分含量,采用滴定法测定NaCl含量。并制定了烫制后的骨碎补的去毛、外观形态、色泽与收率的评分与计算方法。 (2)砂烫骨碎补炮制工艺的研究：先采用单因素试验,以饮片中总黄酮、煎出液总黄酮、煎出物量、膨胀率、收率、去毛情况、形态、色泽为考察指标,考察了温度、加热时间、砂用量等对骨碎补砂烫工艺的影响;再进一步以柚皮苷、总黄酮、收率、去毛情况、形态、色泽为考察指标,采用正交设计试验法对骨碎补砂烫工艺的主要影响因素温度、加热时间、砂用量等工艺条件进行优选。并采用多指标评价全概率综合评分进行有关数据的处理。 (3)盐烫骨碎补炮制工艺的研究：先采用单因素试验,以饮片中总黄酮、煎出液总黄酮、煎出物量、膨胀率、收率、去毛情况、形态、色泽为考察指标,考察了温度、加热时间、食盐用量等对骨碎补盐烫工艺的影响;再进一步以柚皮苷、总黄酮、收率、去毛情况、形态、色泽为考察指标,采用正交设计试验法对骨碎补盐烫工艺的主要影响因素温度、加热时间、食盐用量等工艺条件进行优选。并采用多指标评价全概率综合评分进行有关数据的处理。 (4)砂烫与盐烫骨碎补的比较试验：以柚皮苷、总黄酮、煎出物量、膨胀率、收率、去毛情况、外观形态、色泽为考察指标,对正交试验优选出的砂烫与盐烫最佳工艺所得饮片进行了对比试验。 结果：(1)评价指标建立的实验结果：建立了骨碎补中柚皮苷的高效液相色谱(HPLC)法的含量测定方法,骨碎补中柚皮苷与其他成分获得基线分离,其中柚皮苷的分离度R1.5,理论塔板数N3000;方法学考察结果柚皮苷在0.1525-1.2200μg范围内具有良好的线性关系,回归方程：y=1519252.64x-7296.69,r=0.9996;精密度试验结果表明精密度良好,RSD=0.167%;稳定性试验结果表明供试品溶液在24h内峰面积值基本稳定,RSD=0.768%;重复性试验结果表明其重复性良好,RSD=1.050%;加样回收率试验结果表明其加样回收率符合规定,平均回收率为98.51%。建立了UV法测定总黄酮的含量,确定在283nm处测定柚皮苷标准对照溶液和供试品溶液的吸光度;方法学考察结果总黄酮在6.1-36.6μg／mL范围内具有良好的线性关系,回归方程：y=0.0281x+0.0021,r=0.9998;精密度试验结果表明精密度良好,RSD=1.067%;稳定性试验结果表明供试品溶液在24h内峰面积值基本稳定,RSD=0.318%;重复性试验结果表明其重复性良好,RSD=4.729%;加样回收率试验结果表明其加样回收率符合规定,平均回收率为97.86%。 (2)砂烫骨碎补工艺的研究结果：砂烫温度对骨碎补砂烫工艺各指标影响明显,各指标开始随砂烫温度升高而增加,210℃时各指标的转换值之和(∑ri，j值)最大,而后温度升高反而下降,故烫制温度以210℃为佳。砂烫时间对骨碎补砂烫工艺各指标影响明显,各指标开始随砂烫时间增加而增加,3 min时各指标的转换值之和(∑ri,j值)最大,而后时间增加反而下降,故烫制时间以3min为佳。油砂用量对骨碎补砂烫工艺各指标影响明显,各指标开始随油砂用量增加而增加,油砂用量为药材量的8倍时,各指标的转换值之和(∑ri，j值)最大,而后用量增加基本不