水稻条纹病毒抗性相关基因在大肠杆菌中的表达

作     者：吴双 

作者单位：首都师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张飞云

授予年度：2009年

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

主      题：水稻条纹病毒 s1基因 原核表达 诱导 Pull-Down 

摘      要：水稻条叶枯病是危害水稻的一种主要的虫媒病害(Rice Stripe),它是由水稻条纹病毒(Rice stripe virus:RSV)引起的。在日本、朝鲜及我国都有过多次反复爆发,带来巨大危害。而水稻的栽培品种中的2个亚种对RSV表现出不同的抵抗性。一个亚种为*** ***,品质优良但抗病性差;另一个亚种为*** ***,品质差但抗病性强。实验发现Indica品种的粗分离物中有高活性的抑制RSV合成的抗性因子,经盐析、疏水及离子交换层析等分离,得到的组分仍然有高的抑制活性。 目前已得到一条对RSV有抗性的相关基因,命名为s1。为了研究s1编码蛋白的功能,用大肠杆菌表达载体pET30a+,构建原核表达载体,进行蛋白的原核表达。SDS-PAGE电泳显示:经IPTG诱导,宿主大肠杆菌BL21(DE3)plys表达出了与其分子量大小(32kD)相同的目的蛋白。优化原核表达条件,通过设置时间梯度,发现6小时表达量达到最高;在诱导温度上,我们发现37℃下易形成包涵体,将温度降低到28℃,在不影响表达量的条件下,尽量减少包涵体的产生,最终形成可溶性蛋白。Western-blot进一步证实:目的蛋白得到了正确表达。 我们选择Pull-Down的方法初步探索目的蛋白(S1)的作用。以S1蛋白作为“诱饵蛋白,水稻全蛋白作为“猎物蛋白,在体外大规模筛选能够和目的蛋白相互作用的水稻蛋白,以推测目的蛋白的具体作用。 本论文利用原核表达系统成功地表达出了RSV抗性相关蛋白(S1),并发现水稻中确有蛋白能与目的蛋白结合、相互作用,为后续研究目的蛋白的具体功能打下了基础。