Vaspin通过抑制NF-κB信号途径上调THP-1巨噬细胞ABCA1的表达

作     者：曾梦雅 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：曾高峰;唐朝克

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：Vaspin NF-κB miR-33a ABCA1 胆固醇流出 动脉粥样硬化 

摘      要：目的:Vaspin(内脏脂肪组织来源的丝氨酸蛋白酶抑制物)被证实能对抗动脉粥样硬化发生发展,其具体作用机制尚未被完全认识。本研究主要探讨Vaspin能否通过抑制NF-κB途径上调THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达。方法:将人THP-1单核巨噬细胞诱导转变成为泡沫细胞,经不同浓度的Vaspin处理相同时间或同一浓度Vaspin(100ng/mL)处理不同时间(0,6,12,24,48h),用液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出,油红O染色观察细胞内脂滴情况,高效液相色谱法测定细胞内总胆固醇、游离胆固醇及胆固醇酯含量;Western blot测定细胞内ABCA1蛋白含量,实时定量PCR检测ABCA1 mRNA水平。分别用miR-33a模拟肽(miR-33a mimic)和anti-miR-33a转染THP-1细胞对LPS作用下的细胞处理24h,再加入vaspin处理24h,检测细胞内ABCA1、miR-33a和SREBP mRNA表达水平。用NF-κB抑制剂预处理LPS作用下的THP-1细胞24h,再加或不加vaspin处理,检测细胞内NF-κB p65蛋白、ABCA1蛋白和mRNA表达、miR-33a mRNA表达、细胞胆固醇的流出情况。结果:Vaspin上调THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白及mRNA水平呈时间和剂量依赖性。进一步实验证实vaspin可以抑制mi R-33am RNA及SREBP-2的表达,上调ABCA1mRNA的表达,促进胆固醇流出;NF-κB的特异性抑制剂PDTC处理和荷脂的THP-1细胞,vaspin可削弱NF-κB/miR-33a信号途径对ABCA1表达的抑制作用。结论:Vaspin可通过抑制NF-κB信号途径,下调miR-33a表达,进而上调THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白及mRNA表达,并促进细胞内胆固醇流出。