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干扰素-γ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

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生物化学与生物物理进展 2004年第2期31卷 127-133页

作者：唐朝克易光辉王佐王燕刘录山万载阳袁中华阮长耿杨永宗南华大学心血管病研究所衡阳421001

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察干扰素 γ (IFN γ)对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1 )表达的影响 .以便探讨IFN γ在动脉粥样硬化发生发展中的作用 .采用液体闪烁计数器检测细... 详细信息

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察干扰素 γ (IFN γ)对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1 )表达的影响 .以便探讨IFN γ在动脉粥样硬化发生发展中的作用 .采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量 .运用逆转录多聚酶链反应和蛋白质印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白质的表达 ,采用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度 .发现IFN γ引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性增加 ,而ABCA1mRNA和蛋白质表达、细胞平均ABCA1荧光强度以及apoA 1介导的胆固醇流出呈时间依赖性减少 ,细胞内胆固醇增多 .结果表明IFN γ抑制THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出。

关键词：三磷酸腺苷结合盒转运体A1 流式细胞术胆固醇流出低密度脂蛋白泡沫细胞 Tangier病干扰素-γ 动脉粥样硬化

MiR-216b通过靶向ABCG1促进破骨细胞形成并减少胆固醇流出

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生物化学与生物物理进展 2022年第2期49卷 401-412页

作者：杨五洲黎恒于小华张洁黄新云赵真旺曹奇唐朝克南华大学心血管疾病研究所动脉硬化学湖南省重点实验室湖南省分子靶标新药研究协同创新中心南华大学附属第二医院衡阳421001 海南医学院第二附属医院临床医学研究所海口460106

目的研究miR-216b在破骨细胞分化中的功能和靶基因,探讨其对破骨细胞胆固醇外流的影响。方法建立RANKL刺激诱导RAW 264.7破骨细胞前体细胞分化的细胞模型。进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色测定以评估破骨细胞分化。通过生物信息学分... 详细信息

目的研究miR-216b在破骨细胞分化中的功能和靶基因,探讨其对破骨细胞胆固醇外流的影响。方法建立RANKL刺激诱导RAW 264.7破骨细胞前体细胞分化的细胞模型。进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色测定以评估破骨细胞分化。通过生物信息学分析和双荧光素酶报告基因预测和分析miR-216b与其靶基因ABCG13’非翻译区(3’UTR)的结合以及自由能。转染miR-216b模拟物或抑制剂以验证miR-216b在破骨细胞分化中的作用。液体闪烁计数用于测量来自RAW264.7巨噬细胞衍生的破骨细胞[;H]标记的胆固醇流出。通过高效液相色谱(HPLC)检测RAW 264.7巨噬细胞中的脂质积累。实时定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹分析用于评估破骨细胞中ABCG1的转录和转录后水平。结果当细胞用miR-216b模拟物转染时,破骨细胞的数量、破骨细胞的平均直径和融合指数显著增加,如抗酒石酸酸性磷酸酶阳性染色和显微镜测定所揭示。MiR-216b抑制剂显示出完全相反的结果,这为我们的发现提供了额外的证据。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测表明,miR-216b靶向ABCG1的3’UTR。进一步研究表明,miR-216b抑制破骨细胞中ABCG1的mRNA和蛋白质水平。此外,我们还发现ABCG1 siRNA对ABCG1的沉默增加了破骨细胞的数量、破骨细胞的平均直径和融合指数。MiR-216b通过抑制ABCG1表达减少破骨细胞的胆固醇流出。结论总的来说,这些研究表明miR-216b下调ABCG1表达并抑制破骨细胞胆固醇流出,从而扰乱胆固醇稳态并促进破骨细胞生成。

关键词： miR-216b 破骨细胞 ABCG1 胆固醇流出破骨细胞生成

肝X受体α在泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用

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生物化学与生物物理进展 2003年第6期30卷 940-944页

作者：唐朝克贺修胜易光辉王佐袁中华刘录山危当恒王燕杨永宗南华大学心血管病研究所衡阳421001

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察肝X受体α (LXRα)在THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用 .结果发现 ,2 2 (R ) 羟基胆固醇剂量依赖性增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 ,而DIDS剂量依赖性减少THP ... 详细信息

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察肝X受体α (LXRα)在THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用 .结果发现 ,2 2 (R ) 羟基胆固醇剂量依赖性增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 ,而DIDS剂量依赖性减少THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 .逆转录聚合酶链反应显示 ,2 2 (R) 羟基胆固醇可增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞LXRαmRNA的表达 ,DIDS可抑制THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞LXRαmRNA的表达 .结果提示 ,LXRα在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的调控作用。

关键词：肝X受体α 泡沫细胞调控作用胆固醇流出低密度脂蛋白

艾塞那肽促进肥胖糖尿病大鼠胰腺组织的胆固醇流出

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南方医科大学学报 2021年第3期41卷 370-375页

作者：赵磊张晓宁冯聚玲肖忠盛刘泳龙泓陈向恒唐卫平南华大学附属第一医院胃肠外科湖南衡阳421001 南华大学衡阳医学院转化医学研究室湖南衡阳421001 南华大学附属第一医院肝胆外科湖南衡阳421001

目的利用肥胖糖尿病大鼠模型研究艾塞那肽对胰腺组织ABCA1表达及胆固醇代谢的影响。方法SD雄性大鼠48只,选取部分大鼠通过高脂饮食和STZ药物诱导建立肥胖合并2型糖尿病大鼠模型,所有大鼠分为4组:正常大鼠注射生理盐水组(A组,12只),正常... 详细信息

目的利用肥胖糖尿病大鼠模型研究艾塞那肽对胰腺组织ABCA1表达及胆固醇代谢的影响。方法SD雄性大鼠48只,选取部分大鼠通过高脂饮食和STZ药物诱导建立肥胖合并2型糖尿病大鼠模型,所有大鼠分为4组:正常大鼠注射生理盐水组(A组,12只),正常大鼠注射艾塞那肽组(B组,12只),肥胖糖尿病大鼠注射生理盐水组(C组,9只),糖尿病模型大鼠艾塞那肽组(D组,9只),10周后通过real-time PCR、Western blot、油红“O”染色、组织胆固醇含量测定、HE染色等检测艾塞那肽对大鼠胰腺组织ABCA1表达、胆固醇代谢、胰岛功能的影响。结果通过real-time PCR、Western blot等发现较之SD大鼠,肥胖糖尿病大鼠胰腺组织ABCA1表达降低,油红“O”染色显示胰腺组织出现明显脂质沉积,组织胆固醇含量测定发现胰腺组织胆固醇含量增加,HE染色显示胰岛体积显著缩小,结构紊乱(P胆固醇含量,胰岛数目、体积增多,排列更为规则(P胆固醇流出受阻,胰腺组织胆固醇蓄积。艾塞那肽可上调肥胖糖尿病大鼠胰腺组织ABCA1介导的胆固醇流出,明显降低胆固醇含量,改善胰岛功能。

关键词：艾塞那肽胆固醇流出 ABCA1 胰腺

载脂蛋白A-Ⅰ模拟肽对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响

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中南大学学报（医学版） 2011年第1期36卷 51-57页

作者：谢琼赵水平中南大学湘雅二医院心内科长沙410011 湖南省人民医院心内科长沙410005

目的:观察载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107Bq/孔3H-胆固醇和含50μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育24h后,给予不同浓度的D-4F(0～100... 详细信息

目的:观察载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)模拟肽D-4F对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法:巨噬细胞种植于24孔板,用1.85×107Bq/孔3H-胆固醇和含50μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育24h后,给予不同浓度的D-4F(0～100μg/mL)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用实时荧光定量PCR及Western印迹检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA及蛋白表达。结果:D-4F呈浓度依赖及时间依赖性促进巨噬细胞内胆固醇流出,增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1mRNA和蛋白表达。8-Br-cAMP显著增加D-4F介导的胆固醇流出和ABCA1表达,而蛋白激酶A(PKA)抑制剂虽然对基础胆固醇流出及ABCA1表达几乎无作用,却可以抑制8-Br-cAMP对胆固醇流出和ABCA1表达的促进作用。结论:D-4F促进巨噬细胞胆固醇流出,cAMP释放及ABCA1表达,可能与激活cAMP-PKA-ABCA1通路有关。

关键词：载脂蛋白A-I模拟肽胆固醇流出巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 环磷酸腺苷

载脂蛋白嵌合模拟肽对巨噬细胞胆固醇流出的影响

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中国药理学通报 2010年第12期26卷 1572-1578页

作者：谢琼李峰赵水平湖南省人民医院心内科湖南长沙410005 中南大学湘雅二医院心内科湖南长沙410011 中南大学湘雅二医院胸外科湖南长沙410011

目的观察载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法 RAW264.7巨噬细胞种植于24孔板,用0.5μCi/孔3H-胆固醇和含50mg·mL-1氧化低密度脂蛋白共同孵育24h之后,给予不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(... 详细信息

目的观察载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对RAW264.7巨噬细胞胆固醇流出的影响,并探讨其机制。方法 RAW264.7巨噬细胞种植于24孔板,用0.5μCi/孔3H-胆固醇和含50mg·mL-1氧化低密度脂蛋白共同孵育24h之后,给予不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(0～100mg·mL-1)干预24h,收集细胞用液体闪烁计数法检测胆固醇流出。采用ELISA测定细胞内cAMP含量,采用实时荧光定量PCR及Westernblot检测ABCA1、LXRα和PPARγ的mRNA及蛋白表达。结果 Ac-hE-18A-NH2以浓度依赖方式介导胆固醇流出;50mg·mL-1Ac-hE-18A-NH2干预不同时间,其介导的胆固醇流出率分别为(10.86±1.46)%(6h),(13.43±1.55)%(12h),(20.58±1.34)%(18h),和(26.93±4.37)%(24h)。同时,Ac-hE-18A-NH2还以浓度依赖方式增加细胞内cAMP水平,上调ABCA1、LXRα和PPARγmR-NA和蛋白表达。加用cAMP刺激剂8-Br-cAMP,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率由26.93±4.37增加至35.81±2.73,ABCA1mRNA表达增加了66.67%。而加用PPARγ特异性抑制剂预处理细胞后,PPARγ的表达几乎完全抑制,ABCA1和LXRα的表达也受到一定程度抑制,Ac-hE-18A-NH2介导的胆固醇流出率明显减少。结论模拟肽Ac-hE-18A-NH2可以明显促进巨噬细胞胆固醇流出,其机制可能与cAMP-ABCA1和PPARγ-LXRα-ABCA1两种途径有关。

关键词：载脂蛋白嵌合模拟肽胆固醇流出巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1 环磷酸腺苷肝X受体α 过氧化物酶体增殖物激活受体γ

Rolipram对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

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中国药理学通报 2003年第10期19卷 1177-1182页

作者：唐朝克王佐易光辉万载阳刘录山袁中华王燕危当恒阮长耿杨永宗南华大学心血管病研究所衡阳421001

目的　以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,探讨磷酸二酯酶抑制剂rolipram对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的影响。方法　用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,运用逆转录 -多聚酶链反应和Westernblot... 详细信息

目的　以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,探讨磷酸二酯酶抑制剂rolipram对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的影响。方法　用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,运用逆转录 -多聚酶链反应和Westernblot印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白的表达 ,采用低pH值EIA法测定细胞内cAMP水平。结果　实验显示PDE4抑制剂rolipram能引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞cAMP水平、ABCA1表达和apoA 1介导的胆固醇流出成平衡增加 ,而细胞内总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯明显减少。结论　PDE4抑制剂rolipram增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出。

关键词： Rolipram 泡沫细胞 ATP结合盒转运体1 胆固醇流出低密度脂蛋白

胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响

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中国现代医学杂志 2007年第22期17卷 2724-2727页

作者：贺全国蒋佩严鹏科邓燕江南林琳湖南工业大学绿色包装与纳米生物技术应用重点实验室湖南株洲412007 南华大学药物药理研究所湖南衡阳421001

目的探讨胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。方法采用高效液相分析法检测细胞内胆固醇含量;用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果用ox-LDL处理RAW264.7细胞... 详细信息

目的探讨胆固醇流出对氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。方法采用高效液相分析法检测细胞内胆固醇含量;用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果用ox-LDL处理RAW264.7细胞48h后,细胞内胆固醇明显增加,同时细胞的凋亡率也随之明显增加;而用胆固醇流出刺激物高密度脂蛋白3和β-环糊精处理细胞后,细胞内胆固醇流出显著增加,细胞内总胆固醇明显减少,细胞凋亡率也下降明显。而用胆固醇流出阻断物BFA后,细胞内胆固醇流出明显下降,高密度脂蛋白对细胞的保护作用被明显的削弱。结论促细胞内胆固醇流出能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞的凋亡。

关键词：动脉粥样硬化胆固醇流出细胞凋亡氧化性低密度脂蛋白泡沫细胞

阿魏酸对巨噬细胞泡沫样化过程中胆固醇流出的影响及可能机制

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中国中药杂志 2015年第3期40卷 533-537页

作者：陈阜新汪莲开武汉大学湖北武汉430072 湖北民族学院附属民大医院湖北恩施445000

巨噬细胞泡沫样改变是动脉粥样硬化(AS)的特征性变化,胆固醇外流受阻是引起巨噬细胞泡沫样改变的重要环节之一。该文拟采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,然后用不同浓度的阿魏酸对巨噬细胞源性泡沫细胞进行... 详细信息

巨噬细胞泡沫样改变是动脉粥样硬化(AS)的特征性变化,胆固醇外流受阻是引起巨噬细胞泡沫样改变的重要环节之一。该文拟采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,然后用不同浓度的阿魏酸对巨噬细胞源性泡沫细胞进行处理,观察阿魏酸对ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫样化过程中细胞内脂质代谢、胆固醇流出及介导胆固醇流出的ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)的mRNA和蛋白水平的影响,探讨阿魏酸抗AS的可能机制。结果显示,与对照组相比,ox-LDL处理组细胞内脂质含量明显增加,主要表现为胆固醇酯的含量增加;用阿魏酸处理泡沫样细胞后,细胞内脂质聚集明显减少,尤其是胆固醇酯的含量明显降低,同时胆固醇的流出也显著增加;研究还发现用不同浓度阿魏酸处理泡沫样细胞后,细胞表面ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平均升高。综上所述,阿魏酸可能通过增加巨噬细胞源性泡沫细胞表面ABCA1和ABCG1的表达水平,促进胆固醇流出,从而发挥抗AS的作用。

关键词：阿魏酸动脉粥样硬化胆固醇流出 ATP结合盒转运蛋白