CTLA4-Ig联合shRNA阻断B7/CD28共刺激通路诱导小鼠T细胞免疫无能的研究

作     者：殷述刚 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱理玮;王炜

授予年度：2010年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：shRNA 树突状细胞 CTLA4-Ig 共刺激通路 免疫耐受 

摘      要：目的：本课题采用RNAi技术修饰小鼠骨髓来源树突状细胞(Dendritic Cell, DC),通过抑制DC表面共刺激分子B7-1(CD80)、B7-2(CD86)表达并联合CTLA4-Ig阻断B7／CD28协同刺激通路,从中探讨诱导T淋巴细胞无能的机理。 方法：体外培养小鼠骨髓来源DC,利用已构建的针对B7-1 (CD80)及B7-2(CD86)的shRNA质粒载体pB7shRNA转染DC,流式细胞仪检测转染前后DC表面抗原CD80、CD86、MHCII、CD11c表达情况,荧光实时定量PCR测定转染前后CD80、CD86mRNA表达水平。混合淋巴细胞培养观察pB7shRNA质粒转染DC联合CTLA4-Ig对异系T淋巴细胞增殖能力的影响,酶联免疫法(ELISA)检测混合淋巴细胞培养体系IL-2、IL-4、IL-10、IFN－Y表达水平。 结果：经过体外培养,每只小鼠可获得1.5-2×107个骨髓来源DC,细胞具备典型树突状结构;pB7shRNA转染DC后,其表面抗原CD80、CD86表达由90.429±1.967%、71.603±3.679%分别下降至31.028±1.511%、39.288±1.913%,而MHCII、CD11c表达无明显变化,CD80、CD86mRNA表达水平明显抑制;混合淋巴细胞培养显示,pB7shRNA转染DC联合CTLA4-Ig对异系T淋巴细胞的刺激指数下降(P＝0.000),反应体系中IL-2、IFN-γ表达水平下降,IL-4、IL-10表达水平增高(P=0.000)。 结论：培养基细胞因子选择法可收获大量的骨髓源DC, pB7shRNA质粒载体转染小鼠骨髓DC可明显抑制B7－1及B7-2分子的表达,联合应用CTLA4-Ig和pB7shRNA修饰DC可使其激活异系T淋巴细胞能力下降,混合淋巴细胞反应体系中Thl细胞因子IL-2、IFN－y分泌减少,Th2细胞因子IL-4、IL-10分泌增多,诱使Th细胞分化方向发生免疫偏离,诱导T细胞无能。