抗犬瘟热病毒单域抗体库的构建与犬瘟热基因原核表达质粒的构建

作     者：阿米娜 

作者单位：内蒙古农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周伟光;包福祥

授予年度：2016年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：犬瘟热病毒 犬瘟热病毒关键抗原 单域抗体 噬菌体展示技术 原核表达 

摘      要：犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属的犬瘟热病毒引起的一种高度接触性的急性病毒病。临床上以双相热,红疹,结膜炎,白细胞减少及中枢神经系统损害为主要特征。近年来,犬瘟热疫苗的防治效果逐渐下降,而单克隆抗体以其较高的特异性被广泛应用于诊断和治疗方面,因此犬瘟热诊断治疗制剂的研究开发对犬瘟热的防治具有重要意义。骆驼体内存在天然缺少轻链的重链抗体,重链抗体的优点使其具有广泛的抗原结合能力。噬菌体展示技术主要将抗体分子展示于噬菌体表面后利用抗原筛选,再进行表达和功能鉴定,使基因工程抗体制备方法更方便快捷。本研究旨在制备犬瘟热病毒特异性单域抗体,同时选择具有中和活性的单域抗体制备犬瘟热单域抗体被动免疫制剂。通过犬瘟热病毒免疫双峰驼,分离外周血淋巴细胞后提取总RNA,再进行VHH基因的扩增。将VHH基因片段与pCANTAB5E载体连接,再将重组质粒电转化*** TG1,构建犬瘟热病毒单域抗体库,得到库容1.3×106。并将犬瘟热病毒关键抗原蛋白H、F、N克隆到原核表达载体pET28a中,重组质粒再转化到感受态细胞BL21 (DE3)中,构建好的表达质粒对接下来进行的抗体库筛选提供基础。相应单域抗体的制备,为治疗犬瘟热提供新的思路。