血管紧张素转换酶2(ACE2)在奶牛乳腺中的表达分布及其抗损伤作用

作     者：荣超 

作者单位：南京农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张源淑

授予年度：2016年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

主      题：肾素-血管紧张素系统 血管紧张素转化酶2 奶牛乳腺组织 表达分布 抗损伤作用 

摘      要：本研究旨在研究在ACE2在奶牛乳腺组织中的表达分布及其抗损伤作用。研究主要包括以下两方面的内容:1ACE2/ACE在奶牛乳腺中的表达及细胞定位本研究通过RT-PCR、Western-Blot及免疫荧光检测技术确定RAS系统在奶牛乳腺组织中的表达及细胞定位。试验分别选用健康泌乳期荷斯坦奶牛乳腺活体取样的组织样品和牛乳腺上皮细胞(Mac-T细胞),进行如下试验:1)RT-PCR法确定ACE和ACE2在奶牛乳腺组织中的mRNA表达;2)ACE2基因克隆、扩增并鉴定;2)Western Blot法确定ACE和ACE2蛋白在乳腺组织中的表达;4)免疫荧光法确定ACE/ACE2蛋白在牛乳腺上皮细胞中的细胞定位。结果:1)RT-PCR结果显示:奶牛乳腺组织中ACE和ACE2基因均有表达;2)ACE2目的基因的PCR产物经克隆鉴定、测序大小为202bp,与预期一致;3)Western Blot结果得到了 ACE/ACE2特异性条带,证实奶牛乳腺组织中有两种蛋白的表达;4)细胞免疫荧光结果显示:ACE和ACE2蛋白在牛乳腺上皮细胞中有分布。本研究首次证实牛乳腺中有ACE2和ACE的存在,为进一步研究ACE2在乳腺组织中的抗损伤作用提供了依据。2 ACE2在长期饲喂高精料日粮奶牛乳腺中的抗损伤作用6头健康泌乳期荷斯坦奶牛,随机分为正常对照组(精粗比4:6)和高精料组(精粗比6:4);采用单栏定时定量饲喂,并挤奶,收集乳样。饲喂第20周,活体取乳腺组织,进行如下试验:1)常规法测定乳中体细胞数、LPS含量及乳中和乳腺组织中NAGase、MPO和AKP的酶活力;2)乳腺组织的形态学检测;3)Real-time PCR法分析乳腺组织中ACE、AT1、ACE2、Mas 的 mRNA表达水平;4)ELISA法检 Ang Ⅱ Ang1-7含量。结果:1)高精料组奶牛乳中体细胞数、LPS含量、NAGase和AKP活力均显著高于正常对照组(P0.05),MPO活力两组之间无显著差异;2)HE染色结果显示高精料组奶牛乳腺组织有炎性损伤变化;3)与正常对照组相比,高精料组奶牛乳腺组织中 ACE、AT1、ACE2、Mas mRNA表达量均显著升高(P0.05),ACE2/ACE 比值高于正常对照组;4)与正常对照组相比,高精料组奶牛乳腺组织中Ang1-7含量显著升高(P0.05);Ang Ⅱ的含量则显著降低(P0.05)结论:长期饲喂高精料日粮对奶牛乳腺造成一定程度的损伤,乳腺中RAS处于激活状态,以ACE2-Ang1-7-Mas轴的活力处于优势状态,即ACE2的抗损伤作用占优势,ACE2通过降解AngⅡ,产生Ang1-7发挥了抗损伤作用,对乳腺组织损伤具有一定的保护作用。