不同狂犬疫苗免疫后血清交叉保护作用研究

作     者：张姝 

作者单位：吉林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜春来

授予年度：2013年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主      题：狂犬病毒 疫苗 交叉保护 G蛋白糖基化 假病毒 

摘      要：目的：狂犬病是一种由狂犬病毒引起的致死性疾病，注射狂犬病疫苗是预防发病的重要手段。我国存在多种狂犬病毒流行株，这就要求疫苗能刺激机体产生对不同流行株具有交叉保护的广谱中和抗体。目前对我国市售的狂犬病疫苗的广谱保护性的研究较少，因此本研究将进行动物实验检测这些狂犬疫苗对不同株病毒的保护性。此外，研究表明多种包膜病毒（如HIV-1，流感病毒，丙型肝炎病毒）膜蛋白的糖基化会使病毒逃避抗体的中和作用，而狂犬病毒包膜蛋白G蛋白这方面的研究比较少，本研究也将探索狂犬病毒G蛋白的糖基化对病毒感染能力和抗体中和作用的影响。 方法：本研究使用假病毒系统对我国狂犬疫苗的广谱保护性进行验证。选用四种不同株病毒制备的狂犬病疫苗对balb/c小鼠进行分组免疫并收获血清。制备几种具有HIV-1核衣壳和狂犬病毒G蛋白的假病毒，该假病毒携带荧光素酶报告基因，具有单轮感染能力，感染细胞可以表达荧光素酶。将假病毒与免疫血清共孵育后感染BHK-21细胞，根据荧光素酶表达量确定免疫血清对不同株狂犬假病毒中和能力。另一方面，通过定点突变的方法增加或减少病毒G蛋白上的糖基化位点，检测突变株病毒的感染能力以及免疫血清对病毒的中和能力。 结果：成功包装了能够感染BHK-21细胞并表达荧光素酶的CVS-11株、CTN株、aG株假病毒，免疫了不同狂犬疫苗的小鼠体内产生的抗体对上述假病毒均具有中和能力。病毒G蛋白204位和247位氨基酸的糖基化对病毒的感染能力产生一定影响，单独增加204位糖基化使病毒感染能力增强，单独去除247位糖基化位点使病毒感染能力降低，同时进行上述两种变化则病毒感染能力下降。但改变上述糖基化位点，免疫血清对病毒的中和能力没有改变。 结论：本研究证明了我国狂犬病疫苗免疫后血清对不同流行株具有中和能力，说明市售的四种狂犬疫苗能产生广谱中和抗体。狂犬病毒G蛋白204位和247位糖基化位点对病毒的感染能力具有一定的影响，但不能使病毒逃避抗体的中和作用，说明尽管不同毒株的抗原性和糖基化有所差异，但不影响中和抗体对这些病毒的中和能力。本研究中采用的假病毒检测方法还可以对其他狂犬病疫苗的适用性和质量进行评价。