电化学免疫传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用
作者单位:南京农业大学
学位级别:硕士
导师姓名:朱军
授予年度:2011年
学科分类:1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含:心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学]
主 题:电化学免疫传感器 血吸虫病 邻氨基苯酚 血吸虫抗体 蛋白质检测
摘 要:血吸虫病是一种分布广,种类多,危害性较为严重的病原体寄生虫病,目前检测血吸虫病的方法主要是传统的免疫分析法,但都需要较为复杂、昂贵的仪器及技术熟练的分析人员。同时因为灵敏度低,仅能用于简单的定性或半定量分析,不能完全适应目前血吸虫病防治工作的需要。为了血吸虫病的早期诊断、预防、治疗,开发研制一种灵敏、简便、快捷的检测方法具有较大意义。电化学免疫传感器本身所具有的灵敏、快速、低成本、低能耗等特点,被广泛应用于各种分子诊断中,主要包括核酸(包括DNA和RNA)的分子诊断、蛋白质的分子诊断和代谢物的分子诊断,并逐渐成为非常有潜力的检测技术之一。本论文探讨了电化学生物传感器在血吸虫病诊断中的研究和应用。 首先建立了一种新的电化学免疫传感方法,并将其应用于实际样本的检测。用辣根过氧化物酶(HRP)及新型底物邻-氨基苯酚(O-Aminophenol, O-AP)构建了基于“酶-邻氨基苯酚体系的电化学免疫传感方法,并用于血吸虫抗体检测。邻-氨基苯酚在辣根过氧化物酶(HRP)催化双氧水(H2O2)时被氧化,生成的产物3-氨基吩噁嗪能通过电化学方法检测。实验结果验证了基于“酶-邻氨基苯酚的新型蛋白检测体系检测人血清中血吸虫抗体的可操作性,实现了实际样本的检测。并且,采用方波伏安法作为最终检测方法,具有更高的灵敏性。 随后设计了一种基于血吸虫抗体检测的多通量电化学免疫传感器。类似酶联免疫检测技术,将捕获探针抗原组装在电极上,待检物靶标蛋白和酶标二抗分别反应后,通过检测辣根过氧化物酶催化底物的氧化还原电流实现检测。本系统可以同时进行16个血清样本的检测。另外,这种快速、灵敏、省时、高效的血吸虫病诊断方法不仅实现了实际样本的检测,还为蛋白的检测创建了一个新的平台。