甲磺酸伊马替尼对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP生长及凋亡的影响

作     者：张阔 

作者单位：河北联合大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈燕

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：甲磺酸伊马替尼 顺铂 卵巢癌 增殖 凋亡 

摘      要：目的探讨分子靶向治疗药物甲磺酸伊马替尼对耐顺铂人卵巢癌细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用以及对细胞的诱导凋亡作用，探讨其对顺铂耐药逆转的作用，为卵巢癌的综合治疗提供理论依据。 方法1体外培养卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP，选取不同质量浓度的（1.0～20.0mol/L）甲磺酸伊马替尼以及不同质量浓度的（5.0～160.0mg/L）顺铂（DDP），单独或联合作用于细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的甲磺酸伊马替尼在不同的作用时间单独用药以及两者联合用药，对SKOV3/DDP细胞的增殖抑制效应，计算其生长抑制率、IC50。并根据公式计算出耐药指数（reverse index,RI）及甲磺酸伊马替尼的耐药逆转倍数（reversefold,RF）。2采用流式细胞仪检测甲磺酸伊马替尼与DDP（5.0mg/L）单药及联合用药48h后，观察其对SKOV3/DDP细胞的细胞周期的影响及凋亡率的影响。 结果1SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞均为贴壁生长细胞，经药物作用后的细胞，增殖明显减慢，细胞皱缩，逐渐变为圆形或椭圆形，胞质中出现较多颗粒和亮点，细胞间出现间隙，部分细胞脱落，细胞贴壁不牢固，并可见细胞的碎片。随着药物浓度逐渐增大、作用时间逐渐延长，这种变化就越明显。2不同剂量浓度的甲磺酸伊马替尼对SKOV3/DDP细胞有一定的生长抑制作用，并且呈时间-剂量依赖关系。3不同剂量浓度的甲磺酸伊马替尼和DDP联合作用于SKOV3/DDP细胞48h，联合用药组细胞生长抑制率较甲磺酸伊马替尼单药组明显（P0.05），并伴随药物作用浓度的增加细胞生长抑制率也逐渐增加，两药联合应用具有协同作用，且在甲磺酸伊马替尼5μmol/L时协同作用最大。4浓度为5μmol/L甲磺酸伊马替尼与顺铂联合作用于SKOV3/DDP细胞48h，甲磺酸伊马替尼显著增强了SKOV3/DDP细胞对DDP的药物敏感性（P0.05）。5甲磺酸伊马替尼1.0、2.5、5.0μmol/L分别与DDP联合应用，计算SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为：27.60±0.75、19.61±0.63、12.24±0.24mg/L，联合用药后使细胞对DDP的耐药逆转1.44、2.03、3.25倍，甲磺酸伊马替尼具有耐药逆转作用。6流式细胞检测显示甲磺酸伊马替尼组出现G0/G1期阻滞;两药联合组表现为甲磺酸伊马替尼增加了DDP所致的S期阻滞，S期较单用DDP组升高。7流式细胞仪检测细胞凋亡率提示，甲磺酸伊马替尼可以诱导细胞凋亡，并随浓度的增加，细胞凋亡率也增加;浓度低DDP时诱导细胞凋亡的作用较弱，与甲磺酸伊马替尼联合应用后，凋亡率明显高于单独用药组，说明甲磺酸伊马替尼可通过诱导耐药细胞的凋亡从而增强对DDP的敏感性。 结论1甲磺酸伊马替尼对SKOV3/DDP细胞的增殖有不同程度的抑制作用，且呈时间和剂量依赖关系。2甲磺酸伊马替尼能有效的增加顺铂对SKOV3/DDP细胞株的敏感性，逆转其对顺铂的耐药。3甲磺酸伊马替尼可使SKOV3/DDP细胞出现G0/G1期阻滞，联合用药后，增加了DDP所致的S期阻滞。4甲磺酸伊马替尼单独用药，能有效的诱导细胞凋亡，与DDP联合增加诱导凋亡的能力。