HCMV UL138、UL139和UL140基因在低传代临床分离株中表达和功能的初步研究

作     者：何智强 

作者单位：暨南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周天鸿

授予年度：2006年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：人巨细胞病毒 UL138 UL139 UL140 pcDNA-pp71 BAC-HCMV RT-PCR 表达 

摘      要：目的：通过构建人巨细胞病毒(HCMV)组装的调控转录元件pcDNA-pp71与含有人巨细胞病毒(HCMV)基因组的人工染色体质粒(BAC-HCMV)共转染细胞后获得重组病毒，并通过RT-PCR技术检测HCMV UL138、UL139和UL140基因的mRNA表达，揭示此类临床低传代分离HCMV特有基因编码产物的功能和先天性HCMV感染的致病机理，为研究临床低传代分离HCMV与其先天性感染后致病性差异之间的关系奠定基础。 方法：抽提和纯化BAC-HCMV，与调控该病毒转录的元件pcDNA-pp71共转生长良好的人胚肺成纤维细胞(HELF);收集病变细胞;抽提病毒RNA，根据GeneBank公布的Toledo株UL138、UL139和UL140基因序列及有关文献设计引物，通过RT-PCR检测UL138、UL139和UL140基因mRNA表达;应用生物信息学方法分析UL138、UL139和UL140基因编码产物的结构与功能。 结果：成功构建HCMV的调控转录元件pcDNA-pp71，从病毒基因组的BAC-HCMV与pcDNA-pp71共转的细胞中获得低传代HCMV临床分离株;成功地从病毒的细胞培养物中检测到UL138、UL139和UL140基因mRNA的表达;将UL138、UL139和UL140基因的RT-PCR产物克隆到pMD18-T载体，经测序，结果与GeneBank公布的序列相吻合;运用生物信息学方法分析了UL138、UL139和UL140基因编码产物的结构与功能。