曲古菌素A对延边黄牛体细胞形态、增殖特性及核移植重构胚胎的影响

作     者：王楠楠 

作者单位：延边大学 

学位级别：硕士

导师姓名：方南洙

授予年度：2012年

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

主      题：曲古菌素A 延边黄牛 体细胞 核移植重构胚 体外培养 

摘      要：近些年来,在多种染色质调节中的组蛋白乙酰化对胚胎发育有着极其重要的作用。一些研究者的研究主要集中在胚胎的构建和处理,然而体细胞的选择可以显著提高囊胚率。本实验应用不同浓度的组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古菌素A对延边黄牛体细胞处理不同时间对其形态和增值特性以及对核移植重构胚的影响。研究结果如下： 1、本试验的目的是探讨曲古菌素A (Trichostatin A, TSA)对体细胞的抑制作用影响,采用四甲基偶唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,并研究不同的处理时间对延边黄牛体细胞的形态上的影响。结果表明：低浓度组(5、10ng/m1处理组)的TSA对延边黄牛体细胞的细胞毒性作用不大,对其增殖在24h后出现明显的抑制作用,但在10、25ng/m1两浓度组中,在36h时无显著性差异(P0.05),这可能是由于出现耐药性,随后培养时间延长至48h时出现了显著性差异(P0.05)。而高浓度组(25、50、100ng/ml处理组)中细胞毒性作用逐渐增大,到100ng/m1时细胞大量死亡。与对照组相比TSA对延边黄牛体细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间剂量依赖性。 2、不同浓度TSA处理体细胞对重构胚的卵裂率和囊胚率的影响。lOng/m1和25ng/m1处理组的卵裂率和囊胚率显著高于对照组。但是两组间在卵裂率上无显著想差异,囊胚率25ng/m1组显著高于1Ong/ml组,结果表明最适延边黄牛体细胞克隆的TSA浓度为25ng/m1。 3、探讨TSA不同处理时间对核移植重构胚的卵裂率和囊胚率的影响。在12小时和24小时两个处理时间组,卵裂率和囊胚率无显著性差异,但是24小时的处理时间在卵裂率(70.81%,75.17%vs.66.18,P0.05)和囊胚率上都好于12小时时间处理组(16.91%,17.92%vs.11.09%,P0.05)。 4、不同培养方法对TSA处理的体细胞重构胚的卵裂率和囊胚率的影响。结果表明用25ng/m1的TSA处理体细胞24小时的重构胚在隔离细胞共培养中的卵裂率和囊胚率略好于常规培养。