海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养条件研究

作     者：修爽 

作者单位：大连工业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：祖国仁

授予年度：2015年

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

主      题：琼胶酶 响应面 培养条件优化 酶学性质 

摘      要：能催化琼胶降解的酶就是琼胶酶。按照琼胶酶裂解方式的不同,可将琼胶酶降解为α-琼胶酶(E.C.3.***.1.158)和β-琼胶酶(E.C.3.***.1.81)两种。琼胶酶能将琼胶水解从而得到低聚糖琼胶,其含有十分明显的生物活性,琼胶酶对于食品工业、美容产品工业和生物制药方面都有广泛的应用。琼胶酶也可以用于作生理学、生物学以及细胞学研究工具酶。本实验通过单因素实验和响应面分析法,对产琼胶酶菌株Vibrio agarivorans-1发酵条件进行优化,得到最佳产酶培养基营养组分为:琼脂粉0.312%;酵母粉1.2%;蛋白胨0.05%NaCl 3.514%;CaCl2 0.05%;NaCl 2.5%;FePO4 0.1%;K2HPO4 0.1%;FeSO40.03%。确定最佳发酵条件为:发酵温度40℃、培养基最适pH 7.0;在250 mL的三角瓶中培养基装量40 mL、接种量6%;发酵时转数为160 r/min。在上述培养条件下培养48 h发酵液中的最高酶活力达到9.304 U/mL。对琼胶酶的酶学性质进行初步研究,确定该酶的最适反应温度为40℃,培养30 min时,在20-50℃时热稳定性较好,酶活力残留在80%以上。最适pH为7.0,在pH 6-8范围内,有较好的稳定性。当琼胶底物浓度达到0.2%时,酶活力最高。Mn2+、Zn2+、Cu2+及Al3+对酶活有强烈抑制作用,Na+、K+对酶活的抑制作用较小。