BML-111下调OPN抑制Hela细胞（宫颈癌）增殖和迁移

作     者：戴华 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李里香;郝华

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：宫颈癌 增殖 迁移 脂氧素类似物 脂多糖 骨桥蛋白 P53 Boc-2 

摘      要：目的:人乳头状瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)持续感染引起的宫颈慢性炎症是导致宫颈癌发生的最主要原因。脂氧素(lipoxins,LXs)是炎症反应的“刹车信号[1,2]。故推测脂氧素类似物(BML-111)可能通过抑制宫颈慢性炎症来抑制宫颈癌的发生。本实验拟用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)体外模拟炎症微环境,观察BML-111对LPS诱导的宫颈癌Hela细胞株的增殖和迁移的影响。并与沉默OPN基因的Hela细胞比较,再次观察BML-111对细胞增殖和迁移的影响,并对其发生机制进行研究,为宫颈癌的临床治疗提供实验依据。方法:(1)通过MTT实验,应用LPS诱导Hela细胞的炎症反应,并检测BML-111对细胞存活率的影响;(2)通过Western blot(免疫印迹法)观察BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表达的影响;(3)通过转染沉默OPN基因的质粒,在人Hela细胞产生OPN表达的抑制,通过Western blot方法再次观察BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表达的影响;(4)通过划痕实验和Transwell实验,用LPS诱导Hela细胞的出现炎症反应后,观察BML-111对Hela细胞迁移的影响。结果:(1)MTT显示,用不同浓度的LPS刺激Hela细胞检测24h细胞存活率,空白组、100,10,1,0.1μg/mL LPS刺激组OD值分别为0.8319±0.01894,1.1611±0.01548,1.1587±0.01805,1.1486±0.01209,1.1502±0.01653,LPS的四个浓度组均能促进Hela细胞增殖(P0.05)。(2)MTT结果显示,200μg/L BML-111对LPS诱导的Hela细胞增殖结果如下,空白组、LPS组、LPS+BML-111组和LPS+BML-111+Boc-2组的OD值分别为0.8314±0.01462、1.1744±0.01667、0.8338±0.01867、1.0344±0.02506。BML-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞增殖(P0.05),给予Boc-2预处理后BML-111的抑制增殖作用消失(P0.05)。(3)通过Western blot方法检测,在未转染组中,LPS刺激组OPN、P53、MMP2及MMP9表达均明显增强(P=0.0000.05),BML-111明显抑制LPS诱导的OPN、P53、MMP2及MMP9表达增强(P=0.0000.05)。而加入Boc-2预处理后,BML-111的抑制作用消失(OPN P=0.000,P53 P=0.000均0.05)。(4)通过Western blot方法检测,将Hela细胞转染沉默OPN基因的质粒,在转染48小时后,空白组、LPS组、LPS+BML-111组和LPS+BML-111+Boc-2各组间的OPN、P53(突变型)、MMP2及MMP9蛋白的表达无明显差异。(5)通过细胞划痕和Transwell实验,在未转染组中,相对于空白组而言,LPS刺激组Hela细胞的迁移能力明显增强(P0.05);相对于LPS刺激组,LPS+BML-111组Hela细胞迁移能力明显减弱(P0.05);相对于LPS+BML-111组而言,LPS+BML-111+Boc-2组Hela细胞迁移能力明显增强(P0.05)。在转染组中,各组间蛋白表达无明显差异。结论:***-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞增殖及迁移。***-111抑制LPS诱导的Hela细胞增殖及迁移的作用是通过抑制OPN实现。