同型半胱氨酸致大鼠主动脉内皮细胞损伤的相关机理探讨及叶酸、VitB6、VitB12的保护作用

作     者：向建军 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：许榕仙

授予年度：2006年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：同型半胱氨酸 内皮细胞 叶酸 VitB6 VitB12 

摘      要：目的: 研究同型半胱氨酸对体外培养的大鼠主动脉内皮细胞损伤的可能机理途径,观察叶酸、VitB、VitB对Hcy致内皮细胞损伤的保护作用与组合方案。 方法: 1. Hcy对大鼠主动脉内皮细胞的氧化应激损伤及对一氧化氮生成利用的影响原代培养鉴定大鼠主动脉内皮细胞,取对数生长期细胞按随机区组以2.0×10个/ml浓度接种于96孔培养板,分5个浓度(0.01、0.1、0.5、1.0、5.0)mmol/L Hcy干预组,并设阴性对照组,共6组,各组8个复孔。采用重复测量设计观察不同浓度Hcy干预6h、12 h、24 h后,MTT法观察Hcy对内皮细胞增殖的抑制作用;分光光度比色法观察脂质过氧化指标(SOD、GSH-PX、MDA)及NO、NOS的动态变化。 2. Hcy对RAEC细胞的NF-кB、VCAM-1表达及内皮-单核细胞粘附率的影响设5组,4个浓度(0.01、0.1、1.0、5.0)mmol/L Hcy干预组,一个对照组。干预24h后,免疫细胞化学法比较各组核转录子NF-кB的表达量;RT-PCR法比较各组VCAM-1mRNA表达水平;把大鼠主动脉内皮细胞与鼠单核细胞共同培养,采用考马斯亮蓝法检测粘附的单核细胞蛋白OD值,比较各组内皮-单核细胞粘附率。 3.叶酸、VitB、VitB对Hcy致内皮细胞损伤的保护作用 (1)运用L(3)正交设计表,MTT法观察叶酸、VitB、VitB对Hcy致RAEC增殖抑制的交互保护作用,并选出三个组合方案。 (2)根据正交设计结果,观察叶酸、叶酸+VitB、叶酸+VitB+VitB三种维生素方案对1.0mmol/L Hcy干预后致RAEC损伤的保护作用,即检测MTT、SOD、GSH-PX、MDA、NO、NOS、内皮-单核细胞粘附率、NF-кB及VCAM-1mRNA等指标的变化。