VEGF-B基因靶向siRNA对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠皮下种植瘤的影响

作     者：吴剑飞 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：唐瑞峰

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝癌 HepG2细胞 VEGF-B siRNA 转染 裸鼠 RT-PCR 

摘      要：目的：抗人VEGF-B基因siRNA载体阳性质粒稳定转染人肝癌细胞株HepG2细胞，将VEGF-B低表达HepG2细胞种植于裸鼠皮下成瘤，以探讨VEGF-B基因靶向siRNA对肝癌细胞生物学特性的影响，为肝癌的基因治疗开辟新的靶点。 方法：采用已构建好的3组VEGF-B基因靶向siRNA载体阳性质粒和1组阴性对照空载质粒瞬时转染人肝癌细胞株HepG2细胞，前3组经VEGF-B靶向siRNA阳性质粒转染的HepG2细胞通过杀稻瘟菌素稳定筛选后，获得的3组VEGF-B低表达的HepG2细胞。最后共得到四组HepG2细胞：三组VEGF-B靶向siRNA阳性质粒转染组(分别称之为Bs1组、Bs2组、Bs3组)、阴性对照空载质粒转染组(称之为Bs0组)。将此4组HepG2细胞扩增后分别接种于4组裸鼠皮下(每组6只，共24只)，建立人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型，4组裸鼠分别称之为Ps0组、Ps1组、Ps2组、Ps3组。5周后对比测量4组裸鼠皮下种植瘤的体积、重量，提取肿瘤组织mRNA，经RT-PCR检测VEGF-B基因的表达，研究VEGF-B基因靶向siRNA对肝癌细胞增殖及表达VEGF-B的影响。 结果： 1分别种植Bs0组、Bs1组、Bs2组、Bs3组HepG2细胞的裸鼠，在接种细胞后1周左右均成瘤，5周后肿瘤体积分别为(2.274±0.451)cm、(0.709±0.333)cm、(0.698±0.614)cm、和(0.649±0.430)cm，瘤重分别为(1.451±0.287)g、(0.507±0.212)g、(0.633±0.498)g、和(0.583±0.343)g，Ps1组、Ps2组、Ps3组的体积和瘤重均显著小于Ps0组(P0.05)，各组均未见远处转移。 2在种植VEGF-B基因靶向siRNA的HepG2细胞的荷瘤裸鼠中，Ps0组、Ps1组、Ps2组和Ps3组的VEGF-B mRNA的表达量分别为1.496±0.399、0.640±0.316、0.672±0.364和0.803±0.438。三种VEGF-B靶向siRNA阳性质粒组的裸鼠皮下种植瘤VEGF-B mRNA表达水平均显著低于阴性对照空载质粒组(P0.05)。 结论：成功建立阴性对照空载质粒组和三种VEGF-B基因靶向siRNA转染组HepG2肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型，VEGF-B基因靶向siRNA能够抑制HepG2细胞在裸鼠体内增殖能力，并能降低肿瘤组织VEGF-B基因表达。