不同毒力1型鸭疫里默氏菌外膜蛋白的比较蛋白质组学研究

作     者：杨晓辉 

作者单位：江西农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄瑜

授予年度：2012年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主      题：鸭疫里默氏菌 血清1型 外膜蛋白 比较蛋白质组学 

摘      要：鸭疫里默氏菌(Riemere11a anatipestifer,RA)是一种革兰氏阴性、无鞭毛、不运动、不形成芽孢的小杆状菌,主要侵害雏鸭和雏鹅。该菌引起的鸭疫里默氏菌病,又叫鸭疫败血症、鸭传染性浆膜炎等,是一种高致病性、接触性传染病,除直接感染引起急性或慢性败血症、肝周炎、纤维素性心包炎、气囊炎而发生死亡外,还可出现脑膜炎、干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎以及发育迟缓等症状给养殖户带来间接经济损失。目前本菌已有21个血清型,各种血清型之间基本没有交叉保护性。国内外虽然对RA有一些研究,但在毒力因子和致病机理方面的研究尚比较少。 为筛选可能的毒力因子,本研究以RA血清1型强毒株RAf64、RAf170和低毒力株RAf104为研究对象,应用超声裂解、超速离心法分别提取了三株RA的外膜蛋白,选定pH3-1111cmIPG干胶条,上样量2mg,等电聚焦共50000Vh;聚焦后经过二次平衡,再用12%的SDS-PAGE凝胶进行第二向分离,最后用胶体考马斯亮蓝G-250进行染色。结果,得到背景色低、重复性好和蛋白点较为分散、清晰的2-DE图谱。 用ImageMaster6.0软件对强毒株和低毒力株的外膜蛋白2D凝胶图谱进行比较分析、蛋白点检测和匹配后,挑选强毒株RAf64出现而低毒力株RAf104不出现的13个差异蛋白点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间二级质谱鉴定。经过蛋白点的切取、蛋白脱色、胶内酶解、质谱分析和数据库搜索后,结果鉴定成功12个蛋白点,共代表6类蛋白质,分别为：血红素受体(hemin receptor)、外膜蛋白A/motb区域蛋白(Ompa/motb domin protein)、Tonb依赖性受体(tonb-dependent receptor)、假定蛋白(hypothetical protein)、外膜蛋白A (OmpA)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase)。其中,血红素受体和OmpA可能是RA重要的毒力因子。 综上结果,表明本研究对强毒力RA和低毒力RA菌株外膜蛋白比较研究,成功鉴定12个差异蛋白点、6类蛋白,为RA毒力因子的筛选奠定了基础。