肝细胞癌及其癌前病变组织中相关抑癌基因的遗传学研究

作     者：任拼 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张伟;巩丽

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝细胞癌 杂合性缺失 4q 8p DLC-1基因 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 变异肝细胞结节 免疫组织化学 

摘      要：背景 肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是最常见的恶性肿瘤之一;发病率居第五位，在癌症死亡原因中居第三位。近来流行病学调查研究显示其发病具有显著的地域差异，全世界80%的病例分布在亚洲、非洲等发展中国家和地区;而在北欧、西欧和北美等地区其发病率较低，但最近几年HCC在这些地区的发病率也呈现出上升趋势。HCC的发生发展不仅和环境因素有关，如乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染、黄曲霉毒素(aflatoxins, AFT)、酒精和烟草等;另外，遗传因素也起到重要作用。近年来对HCC发生发展机制的研究表明，原癌基因的激活和抑癌基因的失活是该肿瘤发生的关键环节。许多研究发现在HCC组织中染色体1p、4q、6q、8p、13q、16q和17p的特定区域存在高频率杂合性缺失(loss of heterozygosity, LOH)，在发生染色体LOH的位点附近可能存在与HCC发生相关的肿瘤抑制基因。还有研究发现在HCC发生的早期，异型增生结节(dysplastic nodules, DNs)和肝细胞腺瘤(hepatocellular adenoma, HA)等病变中也发生了与HCC类似的遗传学变异，并且因此被认为是HCC的癌前病变;这些病变组织中染色体8p、17p、5p、13q、14q和16q等区域也存在基因片段的缺失，这就表明在HCC中出现的遗传学改变有可能会出现在肝癌癌前病变中。因此，我们不仅要对HCC，同时也要对其癌前病变进展过程中所涉及的遗传学改变进行深入的探讨，为HCC的诊治提供更为精确的理论依据。 目的 本实验通过对染色体4q和8p上具有高度多态性的9个微卫星位点在HCC和变异肝细胞结节(nodules of altered hepatocytes, NAH)标本中LOH率的检测，并在蛋白质水平进一步检测目的基因编码蛋白质的表达，分析研究与HCC及NAH发生发展相关的抑癌基因。为HCC的预防、早期诊断和治疗提供精确的分子标志物。 方法 1、收集HCC标本和NAH标本;采用显微切割方法选出NAH细胞，和HCC标本一起用等体积酚氯仿抽提基因组DNA;2、对所选出的9个微卫星位点D4S2954、D4S3331、D4S3030、D4S415、D8S1725、D8S1754、D8S1810、D8S1827、D8S552，依据在GeneBank数据库设计的引物分别进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色，然后分析个各位点LOH的发生率，选出在HCC和NAH中LOH发生率较高的位点，并查找其所对应的基因;3、应用S-P免疫组织化学法检测目的基因编码蛋白质在HCC组织、NAH组织及其各自正常对照组织中的表达情况，进行统计学分析。 结果 1、在45例信息性HCC病例中，9个微卫星位点总的染色体LOH率为66.7%;其中D8S552位点的LOH率最高位41.9%;通过χ2检验或者Fisher确切概率法进行统计学分析(P0.05)，该蛋白在NAH和正常肝组织中的表达差异无统计学意义。 结论 1、染色体4q和8p上的三个位点D4S415、D4S3331和D8S