骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠p38和pp38的作用

作     者：吴志伟 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：郭君其

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主      题：骨髓间充质干细胞 阿霉素肾病 蛋白尿 p38 pp38 

摘      要：目的:分离并培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并对其生物学特性进行鉴定。通过肾组织病理观察、生化指标检测、Western blot技术观察骨髓间充质干细胞对阿霉素肾病大鼠的治疗效果,并探讨BMSC对p38和pp38的影响。方法:SD大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定:颈椎脱臼处死大鼠,无菌条件下剪取双侧股骨和胫骨,采集骨髓,通过密度梯度离心法和贴壁培养法,分离并培养BMSCs。体外纯化、传代、扩增。取P3-5代细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。流式细胞仪检测细胞表面标志物,并进行成软骨、成脂分化诱导,鉴定其生物学特性。将大鼠分为四组,即空白对照组、阿霉素组、干细胞组、强的松组,空白组不予任何处理,阿霉素组在注射ADR后予生理盐水静脉注射,干细胞组予BMSCs以2x106/只静脉输注,强的松组给予强的松5mg/d连续灌胃。于不同时间点采取大鼠静脉血,测定血肌酐、尿素、白蛋白、总胆固醇、甘油三脂;收集大鼠尿液,进行24h尿蛋白定量;切取大鼠肾脏,经染色后置于光镜及电镜下观察肾脏病理变化;western-blot检测各组大鼠肾脏在不同时间点蛋白p38和pp38表达差异。结果:1、获取的BMSCs为均一的长梭形,呈集落样生长,纯度高、活性强。流式鉴定结果提示其高表达CD29、CD44、CD90,低表达CD11、CD34、CD45、CD106。经诱导后能成功向成软骨细胞、成脂肪细胞分化。2、各项生化指标显示:干细胞组、强的松组24h尿蛋白定量较阿霉素组有所下降,而肌酐、尿素等水平则未见明显下降。3、肾组织病理观察:阿霉素组肾小球系膜细胞轻度增生,肾小管内有蛋白管型,电镜下可见足突融合及微绒毛变性。而干细胞组和强的松组肾脏只见足细胞轻度水肿。4、Western blot提示:各干预组pp38的表达较空白组均有所上调,但干细胞组、强的松组pp38的表达量较阿霉素组少。结论:利用密度梯度离心法结合贴壁培养法能成功有效地获取大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞保护阿霉素肾病大鼠的可能机制:BMSCs能抑制p38和pp38的表达,并保护足细胞,从而达到减轻蛋白尿的目的。骨髓间充质干细胞在短期内(1周)对改善肾功能无明显作用。