大泷六线鱼（Hexagrammos otakii）肝脏和脾脏细胞学观察及其原代培养的研究

作     者：王文君 

作者单位：中国海洋大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张志峰

授予年度：2008年

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

主      题：大泷六线鱼 肝脏 脾脏 结构 原代培养 造血灶 

摘      要：鱼类肝脏和脾脏是鱼类生物学研究的重点对象。肝脏是鱼类维持体内代谢平衡的重要器官,能调节营养平衡,合成和分泌多种代谢物质。脾脏是一个多功能复合器官,在鱼类的造血和免疫中有重要作用。大泷六线鱼具有较高的经济价值,是近年来新兴的一种海水鱼类养殖品种,然而其生物学背景资料较少。本文采用组织学和细胞学方法对大泷六线鱼的肝脏和脾脏进行了结构研究,进一步对其细胞的体外原代培养进行了研究,旨在丰富大泷六线鱼的生物学研究内涵,为其细胞系的建立奠定基础。 组织学和细胞学研究表明,大泷六线鱼肝脏内结缔组织不发达,肝小叶不明显,中央静脉不规则,肝细胞索围绕中央静脉呈不规则放射状排列,肝血窦狭窄。肝门管区不典型。肝细胞较大,呈多边形,细胞间分界明显,细胞质丰富,细胞核大,多为圆形或椭圆形。脾脏被膜较薄,未见明显脾小梁,红髓和白髓混合分布,界限不清,构成脾脏的细胞种类包括淋巴细胞、红血细胞、粒细胞、网状细胞、巨噬细胞等,有大量黑色素巨噬细胞中心分布。 本文细胞培养的实验目的是为了建立和优化大泷六线鱼细胞体外培养的体系。在肝脏的原代培养中,通过正交实验和随后进行的两因子三水平实验,分别对培养基种类、血清浓度以及渗透压水平进行了筛选,结果表明,在不改变培养基原有渗透压的条件下,使用MEM培养基,添加15%胎牛血清可以取得较好的实验结果。在该培养条件下,细胞迁出旺盛,迁出细胞呈椭圆或多角形,可存活14d左右。在脾脏原代培养实验中,使用MEM培养基的培养效果明显好于L-15培养基,在10%、15%、20%的血清梯度下,都可以长期维持脾脏细胞的体外培养。其中,C型细胞(成纤维样细胞)在三种血清浓度下均可生长,以含15%胎牛血清的培养基中生长最好,至论文完成前已培养近4个月,目前细胞生长状况正常;D型细胞(巨噬样细胞)则在含20%胎牛血清的培养基中生存时间最长,培养50d时,仍然正常生存。此外,在脾脏细胞原代培养中观察到C型(成纤维样细胞)细胞层上出现了造血灶,这些位置可持续产生圆形、明亮的细胞并将其释放到培养液中,因此推测C型细胞是某种可以支持造血活动的基质细胞,而大泷六线鱼的脾脏也具有活跃的造血功能。