中国林蛙蛙头提取物中抗凝血活性物质的研究

作     者：徐丽琴 

作者单位：辽宁师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：尚德静

授予年度：2006年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：林蛙头提取物 提取工艺 抗凝血活性 抗凝效价 

摘      要：中国林蛙(Rana Chensinensis)，俗称田鸡，蛤士蟆，属两栖纲，无尾目蛙科，是我国特有的经济价值很高的药用两栖动物。它在我国许多地区都能生存，但主要分布在东北三省。中国林蛙浑身都是宝，具有较高的药用价值和经济价值，目前国内关于中国林蛙的利用多为雌蛙的制药及蛙肉的食用等传统的研究范畴，有关中国林蛙深加工的报道很少。本文旨是从林蛙头中分离出具有抗凝血活性的提取物，为大幅度提高林蛙产品的附加值，实现其综合利用开辟一条新的途径。 首先，实验以中国林蛙的蛙头为原料，经过剪切，匀浆，碱解，去蛋白，干燥等处理后得到一种有抗凝血活性的提取物，并以L(3)正交实验设计优化选出抗凝血提取物的最佳提取工艺是匀浆时加入的生理盐水的量为林蛙头体积的2倍，碱解时的时间为8h，碱解时加入碱液的体积为原液的5倍，碱解时的温度为30℃。并在此条件下进行了中试实验，结果表明此放大中试试验是完全可行的，可以用于工业化生产。 其次，对林蛙头提取物进行了抗凝血活性研究，结果显示林蛙头提取物在体外能延长凝血时间，复钙凝血时间，凝血酶原时间，凝血酶时间，抑制凝血酶活性，并和剂量呈依赖关系。但没有水解纤维蛋白的活性和对纤溶酶原激活活性。在体内能延长凝血时间和出血时间，但和剂量没有依赖关系。并对林蛙头提取物进行了抗凝血性能的评价，大概有肝素活性的二十分之一，同时用试管血液凝固方法测定了其抗凝血活性的效价为5.2U。 然后，对林蛙头提取物进行了理化性质分析。结果表明，林蛙头提取物易溶解于水中和稀酸溶液中，尤其易溶于稀碱溶液中，不溶于乙醇，乙醚，乙酸乙酯，丙酮等有机溶剂。林蛙头提取物热稳定性较好。在强酸和强碱下活性降低。由组分测定可知，林蛙头提取物中含有多糖，蛋白，氨基酸，氨基己糖，半乳糖醛酸，硫酸根等物质，是一种蛋白聚糖复合物。本实验也确定了林蛙头提取物的抗凝的有效成分是蛋白和多糖。林蛙头提取物可能是一种氨基多糖，是类肝素类物质。 最后，也对林蛙头提取物的抗凝血机制进行了初步的探索，研究结果表明，林蛙头提取物是通过抑制血浆中的凝血因子Ⅱ，Ⅶ，Ⅹ的活性来达到抗凝血作用的。林蛙头提取物的抗凝作用作用机制和肝素相似，推测林蛙头提取物是类肝素物质。 在以上研究结果的基础上，本研究得出结论：林蛙头提取物是一种蛋白聚糖，实验室提取工艺适合工业化大生产，它在体内体外均有抗凝血作用，但没有溶栓作