胞质雄性不育新基因T1243在大白菜中的遗传转化

作     者：吴玲玲 

作者单位：山西大学 

学位级别：硕士

导师姓名：裴雁曦

授予年度：2013年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

主      题：大白菜 胞质雄性不育 再生体系 遗传转化 

摘      要：目前在大白菜杂交育种实践中,雄性不育材料非常少,本研究旨在将从茎瘤芥(*** var. tumida Tsen et Lee)胞质雄性不育系中克隆获得的T1243基因整合到大白菜基因组中。首先构建含有茎瘤芥的细胞质雄性不育新基因T1243的植物表达载体XF003-T1243;建立大白菜的离体再生体系;并对大白菜的遗传转化体系进行优化,成功获得转基因植株。丰富大白菜不育系的育种材料,为细胞质雄性不育机理研究奠定了基础。 本试验的主要研究结果如下： 1、大白菜再生体系的建立：以山西地区广泛栽培的5个大白菜品种为材料,带柄子叶为外植体,通过正交设计试验研究了品种、NAA、6-BA、AgNO3等因素对大白菜离体再生的影响。结果显示：品种津育75在培养基MS+2mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+7mg/L AgNO3的条件下再生率最高,达76.92%。 2、植物表达载体XF003-T1243的构建：分别酶切从茎瘤芥中扩增获得的T1243和表达载体XF003,然后进行连接,构建了细胞质雄性不育线粒体基因T1243的植物表达载体XF003-T1243,通过PCR和酶切鉴定XF003-T1243载体构建正确,并导入农杆菌LBA4404。 3、大白菜的遗传转化体系的优化：以大白菜带柄子叶为外植体,通过农杆菌介导法,优化大白菜的遗传转化体系,得出结论：津育75的最佳筛选培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.3mg/L NAA+7.0mg/L AgNO3+7.5mg/L Kan+200mg/L Amp,外植体在黑暗条件下预培养2d,然后用OD6000.1菌液侵染2min,共培养2d时转化率最高,为35.48%。对抗性植株进行分子检测,结果表明T1243基因已整合到大白菜基因组中,并可以正常表达。