对硫磷残留的酶联免疫检测技术的研究

作     者：于秋香 

作者单位：中国农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：翟志席;王保民

授予年度：2003年

学科分类：090403[农学-农药学(可授农学、理学学位）] 09[农学] 0904[农学-植物保护] 

主      题：对硫磷 残留 ELISA 

摘      要：本研究通过制备对硫磷的特异性抗体，建立了蔬菜中对硫磷残留的酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。先将对硫磷苯环上的硝基还原为氨基，然后采用重氮化法将氨基-对硫磷与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)相偶联，分别合成了免疫原和包被抗原：氨基对硫磷-BSA、氨基对硫磷-OVA。对合成的抗原进行紫外可见扫描，确证偶联成功。用免疫原免疫新西兰大耳白兔，制得对硫磷抗血清，测得其效价为1：2000，用饱和硫酸铵沉淀法得到纯化抗体，与其它类似物的交叉反应为甲基对硫磷：1.22％，毒死蜱：0.09％，杀螟松：0.06％，标准曲线的线性范围为5-1000ng／mL。用此血清建立的ELISA方法检测蔬菜样品(小白菜、豆角、辣椒)中添加的对硫磷标准样品，平均回收率为96.52％，与GC方法的相关性很高，准确性大大高于酶抑制法，整个测定大约在(不包括包被时间)1.5h内完成。