牛磺酸、EDTA和类固醇激素对小鼠胚胎体外发育的影响

作     者：衣少莉 

作者单位：中国农业大学 

学位级别：硕士

导师姓名：崔胜

授予年度：2004年

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

主      题：小鼠,雌激素,孕激素,牛磺酸,EDTA,胚胎移植 

摘      要：为完善体外培养体系，提高体外发育的胚胎质量，本实验研究了牛磺酸(Tau)、EDTA、雌激素(E2)和孕激素(P)对昆明白小鼠胚胎体外发育的影响。在此基础上，通过胚胎移植技术观察了不同来源的囊胚在移入子宫后的发育情况，以比较体外培养和体内发育的囊胚质量。 昆明白小鼠的1-胚胎在M16培养液中呈现典型的2-细胞发育阻滞现象。本实验结果证明，M16培养液中分别添加牛磺酸(M16+Tau)、EDTA(M16+EDTA)、或同时添加牛磺酸和EDTA(M16+Tau+EDTA)都能克服2-细胞阻滞并发育到囊胚期。M16+EDTA、M16+Tau、M16+Tau+EDTA组的囊胚率分别为60％、61.9％、73.6％，M16+Tau+EDTA组显著高于前两组(P0.05)。且M16+Tau+EDTA培养液中的囊胚总细胞数、内细胞团数、内细胞团与滋养层细胞数的比率均显著高于M16+Tau和M16+EDTA培养液的(P0.05);内细胞团占总细胞数的百分率也相应增加。由此说明牛磺酸和EDTA不仅能克服小鼠2-细胞胚胎的体外发育阻滞，而且两者能协同促进囊胚的形成。 另外，mM16中不同浓度的牛磺酸也能显著地影响小鼠1-细胞胚胎的发育。本研究结果显示，如果mM16培养液中牛磺酸浓度为0mM、2.5mM、5mM和10mM，囊胚率分别为82.7％、87％、89％、87.8％;当牛磺酸浓度分别为510mM、100mM，囊胚率分别显著下降至76％、51％;当牛磺酸浓度达到150mM和200mM，1-细胞胚胎只能发育到8-细胞期和-2细胞期。囊胚平均总细胞数在牛磺酸浓度为5mM时为65.7，而在浓度为0mM、2.5mM、10mM、50mM、100mM时都显著下降，分别为48、57、52、39、23。上述结果表明，mM16培养液中当牛磺酸浓度为5mM时，囊胚率和囊胚平均总细胞数均高于其它浓度组。因此，5mM可能是昆明白小鼠胚胎体外发育最适宜的牛磺酸浓度。 为研究类固醇激素对胚胎体外发育的影响，观察了mM16培养液中添加雌激素(E2)和孕激素(P)后对昆明白小鼠胚胎发育的影响。结果显示，在同时添加E2和P的mM16培养液中小鼠1-细胞胚胎发育的囊胚率为93％，显著高于在mM16培养液(对照组)中的87.67％(P0.05);在单独添加E2和P的mM16培养液中的囊胚率分别为91％、90.3％，虽高于对照组，但无统计学差异(P0.05)。同时添加E2和P的mM16培养液中囊胚的细胞总数、内细胞团数、内细胞团占总细胞的百分率和内细胞团与滋养层细胞数的比率低于体内正常发育囊胚，但显著高于其它体外培养组(P0.05)。由此说明小鼠胚胎体外培养时同时添加雌激素和孕激素可能通过协同作用促进早期胚胎的发育和囊胚的形成。 在上述研究的基础上，为评价囊胚质量，通过胚胎移植技术，观察和比较了不同来源的囊胚移植后的发育情况。分别选取小鼠1-细胞胚胎在mM16、mM16+E2、mM16+P、mM16+E2+P各组培养液中培养的囊胚、小鼠体外受精-体外培养的囊胚和体内正常发育的囊胚，进行子宫内移植。结果显示：体内正常发育的囊胚移植后的发育情况最好，其着床率、流产率和出生率分别为90.67％、16.18％、82.67％;mM16+E2+P组的着床率和出生率分别为82.67％、34.67％;高于其它体外培养组，流产率为45.16％，低于其它体外培养组;体外受精组的着床率和出生率分别为53.34％、6.67％，显著低于其它各组，流产率为72.5％，显著高于其它组。由此说明，体外受精的胚胎的质量显著低于体内受精的;体外培养液中同时添加雌激素和孕激素能协同促进小鼠胚胎的体外发育，提高胚胎移植后的发育潜力。