Nlrp9b在小鼠早期胚胎发育中的表达、定位及功能

作     者：林秀娇 

作者单位：福建农林大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张文昌;彭辉

授予年度：2015年

学科分类：08[工学] 0905[农学-畜牧学] 09[农学] 0836[工学-生物工程] 090501[农学-动物遗传育种与繁殖] 

主      题：Nlrp9b RNA干扰 功能 生物信息学 

摘      要：实验以小鼠卵母细胞和早期胚胎为研究对象,采用免疫组化、qRT-PCR、 Western blot、免疫荧光和RNA干扰等方法研究Nlrp9b在小鼠卵子发生和早期胚胎发育过程中的表达、定位和功能,利用多种生物信息学软件对小鼠Nlrp9b基因编码的氨基酸序列进行分析,并通过同源建模对翻译的蛋白质的三维结构进行预测。结果如下：(1)利用RT-PCR和免疫印迹方法分析Nlrp9b在小鼠多个组织中的表达,结果表明Nlrp9b的转录物仅在小鼠的卵巢和小肠中存在,NLRP9B蛋白的表达被限制在不同卵泡的卵母细胞中而且随着小鼠年龄的增加而下降。免疫荧光结合激光共聚焦显微镜的分析表明NLRP9B蛋白主要定位在附植前胚胎的胞质中。(2)在GV期卵母细胞中沉默Nlrp9b并不影响小鼠卵母细胞的成熟率,将这些Nlrp9b沉默的成熟卵母细胞进行孤雌激活和体外培养,结果显示这些孤雌胚胎在体外能够正常发育;同样合子中沉默Nlrp9b后,NLRP9B蛋白显著降低但胚胎发育没有被阻滞,与对照组相比,沉默组的囊胚形成率也无差异,结果表明小鼠卵母细胞的成熟和早期胚胎发育不需要Nlrp9b的参与。(3)用生物信息学软件分析表明Nlrp9b基因的进化与Nlrp9a和Nlrp9c的关系较远,同时分析了NLRP9B蛋白的全长1003aa,等电点为7.82,分子质量114802.16,极性氨基酸占41.3%,二级结构的螺旋部分占将近一半49.05%,具有两个核苷酸结构域DAPIN和NACHT,7个亮氨酸重复结构,NLRP9B不含有信号肽位点。