补体系统成分在2型糖尿病肾病大鼠肾脏组织中高表达

作     者：许锦婷 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：林夏鸿

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：2型糖尿病 慢性肾脏疾病 动物模型 补体系统 

摘      要：目的分析补体系统中经典途径、替代途径、甘露糖结合凝集素途径中多个补体成分在2型糖尿病肾病大鼠肾脏中的表达水平,探讨补体系统在2型糖尿病肾病中的致病作用。方法1、建立2型糖尿病模型及2型糖尿病肾病模型:24只5周龄的雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、2型糖尿病组(DM组)及2型糖尿病肾病组(DN组)。对照组给予普通饲料喂养,DM组、DN组给予高脂高糖饲料喂养以诱导胰岛素抵抗。8周后,大鼠禁食不禁水12小时,DM组、DN组予1%STZ 30mg/kg腹腔注射一次,对照组予腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液一次,以72 h后连续三天随机血糖≥16.7 mmol/L为2型糖尿病模型造模成功。大鼠出现糖尿病后,DN组则继续给以高脂高糖饲料喂养8周以建立糖尿病肾病模型,以24h尿白蛋白排泄量≥30mg/24h为出现早期肾脏病变标准。2、测量大鼠体重、肾重,用罗氏血糖仪测大鼠末梢血糖(光化学法),采用胰岛素测定ELISA试剂盒测空腹胰岛素、尿白蛋白ELISA试剂盒测24小时尿白蛋白浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR=空腹胰岛素×空腹血糖/22.5)。3、大鼠肾脏组织行苏木素-伊红染色、过碘酸-希夫染色观察肾脏组织形态改变,计算系膜指数(系膜指数=系膜基质面积/肾小球面积×100%)、小动脉硬化指数(小动脉硬化指数=管壁面积/(管壁面积+管腔面积))、管型面积百分比(管型面积百分比=管型面积/总视野面积×100%)。4、免疫组化及western blot检测各组大鼠肾脏补体系统多成分的表达水平及足细胞标志蛋白nephrin表达水平。结果1、STZ注射前,DM组及DN组体重较对照组均升高(525.6±35.0g vs.477.6±25.6g,P=0.01;541.4±39.7g vs.477.6±25.6g,P=0.001),DM组及DN组HOMA-IR较对照组均高(2.76±1.20 vs.1.50±0.13,P=0.006;2.40±1.27 vs.1.50±0.13,P=0.036),说明DM组及DN组出现胰岛素抵抗。STZ注射后1周,DM组及DN组血糖较对照组均高(23.11±2.78mmol/L vs.6.06±0.92mmol/L,P0.05)。3、免疫组化(IHC)阳性表达积分光密度(IOD)(×10)及western blot条带相对灰度值结果显示:肾脏补体成分C1q IOD在DN组中较对照组及DM组升高(10.38±4.15 vs.5.69±3.86,P=0.01;10.38±4.15 vs.3.37±9.76,P0.001)。MBL IOD在DN组中较对照组及DM组升高(6.79±4.56 vs.2.39±0.94,P=0.004;6.79±4.56 vs.2.92±0.8,P=0.01),WB条带相对灰度值在DN组中较对照组及DM组升高(3.91±1.13 vs.0.83±0.39,0.001;3.91±1.13 vs.1.34±1.05,P=0.004)。MASP-2 IOD在DN组中较对照组及DM组升高(12.50±3.10 vs.3.27±2.78,P0.001;12.50±3.10 vs.4.72±5.16,P0.001),WB条带相对灰度值在DN组中较对照组及DM组升