塞来昔布联合PDTC对人结肠癌细胞HT-29的抑制增殖和促凋亡作用及其机制

作     者：王永翔 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：师水生

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：塞来昔布 吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC) 结肠癌 增殖 凋亡 

摘      要：目的 研究环氧合酶抑制剂塞来昔布联合吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC）对人结肠癌细胞的抑制增殖和促凋亡作用及其对COX-2、NF-kB、Caspase-3基因表达的影响，探讨塞来昔布联合用药抗肿瘤的机制 方法 培养结肠癌细胞HT-29，实验用不同浓度的塞来昔布（0、30、60、120、240^mol/L）以及塞来昔布、PDTC联合组分别处理结肠癌细胞，CCK-8法观察药物处理24h、48h后结肠癌细胞的增殖情况;流式细胞术检测药物处理24h后细胞凋亡情况，实时荧光定量PCR检测COX-2、NF-kB、Caspase-3基因的表达。 结果 ***-8法检测药物对结肠癌细胞的生长抑制作用 塞来昔布能抑制结肠癌细胞（HT-29）的增殖，作用24h、48h时，在相同时点，随着塞来昔布浓度的提高，其抑制作用呈浓度依赖性，0、30、60、120pmol/L浓度组间有差别，差别有统计学意义（P0.05）;240|^mol/L组和120阿ol/L组相比差别不明显，差别无统计学意义（P0.05），不同时点相同单药组组间比较有差别，差别有统计学意义（P0.05）:塞来昔布120|a,mol/L作用48小时时抑制作用最明显。 药物处理细胞24h、48h后，联合组（塞来昔布30nmol/L，PDTC100|^mol/L;塞来昔布6C^mol/L，PDTC100|^mol/L;塞来昔布120|^mol/L，PDTClOC^mol/L）明显大于塞来昔布30、60、120|^mol/L单药组，差异有统计学意义（P0.05），联合组间比较，差别有统计学意义（P0.05） 2.各组凋亡指数比较 塞来昔布不同浓度组处理结肠癌细胞24h后凋亡趋势呈浓度依赖性，差别有统计学意义（P0.05） 联合组（塞来昔布30nmol/L，PDTC100|^mol/L;塞来昔布30|^mol/L，PDTClOOpmol/L）较单用塞来昔布30、60、120pmol/L组有差别且差别有统计学意义（P0.05）;3.各组药物对结肠癌细胞（HT-29） COX-2、NF-kB、Caspase-3mRNA的影响： 塞来昔布（30、60、120|^mol/L）较空白对照组COX-2、NF-kB, Caspase-3mRNA的表达均有差别，差别有统计学意义（P0.05） 联合组（塞来昔布30nmol/L，PDTC50|^mol/L;塞来昔布60|^mol/L，PDTC50|^mol/L;塞来昔布120nmol/L，PDTC50|^mol/L）较单用塞来昔布30、60、120|^mol/L组COX-2、NF-k B基因表达降低，Caspase-3基因表达升高且差别有统计学意义（P0.05）。 结论 （1）塞来昔布单药组和联合组均能抑制人结肠癌细胞的增殖，促进其凋亡，联合组作用强于单药组;其机制可能与COX-2、NF-kB基因的下调有关，Caspase-3基因表达上调有关。 （2） PDTC作为一种特异性的NF-k B抑制剂，能增强非细胞毒性药物塞来昔布对HT-29细胞的促凋亡作用，通过抑制NF-k B活化增强抗肿瘤药物的敏感性和效应可能成为抗肿瘤药物发展的一个思考方向。