神经病靶酯酶在子痫前期疾病发生中的作用及其机制的研究

作     者：钟婷 

作者单位：南昌大学 

学位级别：硕士

导师姓名：况海斌

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：NTE 子痫前期 滋养层细胞 迁移 侵润 

摘      要：目的： 滋养层细胞侵入异常是子痫前期发病的重要环节，其病因未明。近年，研究显示神经病靶酯酶（neuropathy target esterase，NTE）与胎盘的发育密切相关，其代谢调节的磷脂酰胆碱，注射至妊娠小鼠体内可诱导出子痫前期的模型，且与滋养层细胞侵润密切相关，故推测NTE可能参与子痫前期疾病的发生。本研究拟探讨NTE在子痫前期表达变化及其对胎盘滋养层细胞迁移及侵润的影响和作用机制。 方法： （1）通过实时定量PCR方法和免疫组化技术，检测NTE mRNA和蛋白在正常妊娠和子痫前期胎盘组织表达变化;（2）通过转染pEGFP-N3-NTE和pGenesil-1-shNTE质粒，在人HTR-8/SV-neo滋养层细胞的产生NTE过表达或抑制;（3）通过划痕实验和Transwell方法，观察NTE对HTR-8/SVneo滋养层细胞迁移和侵润的影响;通过MTS实验，观察NTE过表达或抑制后对HTR-8/SVneo滋养层细胞增殖的影响;（4）通过明胶酶谱和ELISA方法检测细胞上清液MMP-2，9和TIMP-1，2的变化;（5）通过Western blot方法，观察NTE对HTR-8/SVneo滋养层细胞ERK-1/2和AKT信号通路的影响. 结果： （1）通过实时定量PCR检测显示，相对于正常妊娠的胎盘组织，在子痫前期胎盘组织中，NTE mRNA表达水平明显下降（p0.05）。相对于Control shRNA组，NTE shRNA组，NTE mRNA（p0.05）。相对于Control shRNA组，NTE shRNA组HTR-8/SVneo细胞迁移和侵润能力均明显减弱（p0.05）。 （6）通过明胶酶谱实验分析显示，转染后24h和48h，相对于未转染Bla-nk组， pGenesil-1组和Control shRNA组，HTR-8/SVneo分泌MMP-9均无明显变化（p0.05）。相对于Control shRNA组，NTE shRNA组HTR-8/SVneo细胞分泌MMP-9显著性减少（p0.05）。 （8）Western blot检测显示，转染后48h，相对于未转染Blank组，pGenesil-1组和Control shRNA组，HTR-8/SVneo细胞ERK1/2和AKT磷酸化均无显著影响（p0.05）。相对于Control shRNA组，NTE shRNA组能显著抑制HTR-8/SVneo细胞ERK1/2磷酸化（p0.01）和AKT磷酸化（p0.05）。相对于pGenesil-1组，NTE-EGFP组明显促进HTR-8/SVneo细胞ERK1/2磷酸化（p0.01）和AKT磷酸化（p0.001）。 结论： （1）相对于正常妊娠的胎盘组织，在