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miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用机制研究

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miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用机制研究

作者：王蕊郑州大学

学位级别：硕士

背景滋养层细胞分化异常可导致滋养层细胞侵润和迁移异常,引发子痫前期（Pre-eclampsia,PE）等妊娠相关疾病。子痫前期是一种妊娠期特有的多器官多系统受影响的高血压综合征,多于妊娠20周后出现,并以高血压、蛋白尿等症状为主要表现,世... 详细信息

背景滋养层细胞分化异常可导致滋养层细胞侵润和迁移异常,引发子痫前期（Pre-eclampsia,PE）等妊娠相关疾病。子痫前期是一种妊娠期特有的多器官多系统受影响的高血压综合征,多于妊娠20周后出现,并以高血压、蛋白尿等症状为主要表现,世界范围内的发病率约为3%%,是孕产妇及新生儿死亡的重要原因之一。微小RNA（miRNA,MicroRNA）是一类调节基因转录后表达的短链非编码小分子。在妊娠期间,miRNA参与一系列的反应,包括胚胎植入前的子宫内膜准备,与免疫反应相关的基因重组,胎盘发育和血管生成等过程,并且长期以来一直被认为与胎盘发育异常和妊娠并发症息息相关。研究表明,多种miRNA在胎盘中大量表达,且miRNA在胎盘中的异常表达可能是引发子痫前期的病因之一。但目前仍需深入研究miRNA对胎盘发育的影响及其具体作用机制。在前期实验研究中,已发现miR-181a-5p是一种在重度子痫前期患者的血浆和胎盘中表达均上调的miRNA。本课题着重研究了miR-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润和迁移中的作用及分子机制,从而深入了解重度子痫前期的发病机制。目的通过本课题,阐明miRNA-181a-5p在胎盘滋养层细胞侵润及迁移中的作用及其潜在分子机制,以期深入了解miRNA在胎盘发育及子痫前期发生发展中的作用。材料和方法1.根据纳入及排除标准（参照第八版《妇产科学》）收取胎盘组织样品,均匀取样清洗后,直接液氮冻存备用。2.通过使用四个免费数据库（包括TargetScan 7.0,PITA,PicTar和miRanda）预测miR-181a-5p直接作用的靶基因,将IGF2BP2作为待选的miR-181a-5p直接底物并进行后续实验设计。3.在重度子痫前期产妇胎盘中,采用RT-qPCR技术检测miRNA-181a-5p表达水平;采用Western Blot技术检测IGF2BP2蛋白的表达。4.采用Transwell细胞侵润迁移实验研究miR-181a-5p对HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移的作用。5.构建荧光素酶载体后,将其与miR-181a-5p模拟物或抑制剂共转染后,通过双荧光素酶测定实验检测荧光素酶报告基因活性,并通过RT-qPCR和Western Blot技术检测了miR-181a-5p在HTR-8/SVneo细胞中对IGF2BP2 mRNA和蛋白质水平的影响,从而验证miR-181a-5p是否直接抑制IGF2BP2。6.采用Transwell细胞侵润迁移实验探究过表达或抑制IGF2BP2时,其对HTR-8/SVneo细胞侵润和迁移能力的影响。7.在转染miR-181a-5p的HTR-8/SVneo细胞中共转染IGF2BP2基因的过表达质粒,采用Transwell细胞侵润迁移实验检测侵润迁移能力的变化和Western Blot技术检测IGF2BP2表达量改变,从而探究miR-181a-5p对滋养层细胞侵润和迁移的抑制作用是否通过直接抑制IGF2BP2实现。结果1.在重度子痫前期产妇胎盘中,miRNA-181a-5p表达显著上调,IGF2BP2蛋白表达量显著下调。***-181a-5p抑制HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移,而IGF2BP2促进HTR-8/SVneo细胞的侵润和迁移。***-181a-5p直接抑制IGF2BP2。***-181a-5p通过IGF2BP2 mRNA 3’-UTR上的保守结合位点对IGF2BP2产生抑制作用。***-181a-5p通过直接降调IGF2BP2抑制滋养层细胞的侵润和迁移。结论本课题证明了miR-181a-5p通过直接降调IGF2BP2的表达抑制胎盘滋养层细胞的侵润和迁移,从而揭示了miR-181a-5p在重度子痫前期疾病中的潜在作用机制。

关键词： miR-181a-5p IGF2BP2 滋养层细胞侵润迁移重度子痫前期

OCT1对卵巢癌中迁移侵润的调控作用及其机制研究

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OCT1对卵巢癌中迁移侵润的调控作用及其机制研究

作者：沈艳婷江苏大学

学位级别：硕士

背景及意义OCT1(八聚体结合转录因子1)基因作为一个转录因子,参与调控多种生理病理过程。目前已有研究表明,OCT1参与调控胃癌、结直肠癌等多种癌症的进程,并且与病人的预后密切相关。在癌症中,OCT1通过调控ERK等信号通路,促进了癌细胞... 详细信息

背景及意义OCT1(八聚体结合转录因子1)基因作为一个转录因子,参与调控多种生理病理过程。目前已有研究表明,OCT1参与调控胃癌、结直肠癌等多种癌症的进程,并且与病人的预后密切相关。在癌症中,OCT1通过调控ERK等信号通路,促进了癌细胞的增殖、迁移及侵润。直到目前,OCT1在卵巢癌中的作用及其机制尚未被研究和报道。因此,OCT1在卵巢癌中的研究极有可能定义出卵巢癌诊断和治疗的新的生物标记,并为卵巢癌的靶向治疗提供新的实验和理论依据。方法以OCT1为核心,通过免疫组织化学(IHC)及免疫印迹(Western blot)方法分别对人卵巢癌临床样本及不同的卵巢癌细胞株中OCT1的表达情况进行检测,对OCT1与卵巢癌的相关性进行评估。采用小干扰RNA(siRNA)逆转染及慢病毒感染对卵巢癌细胞进行特异性沉默/敲减及过表达,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot验证其效果。用MTT、transwell小室迁移和侵润实验考察OCT1对卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵润能力的影响,并通过Western blot检测其相关蛋白的变化。最后,通过卵巢癌小鼠肺迁移模型,在验证短发夹RNA(shRNA)特异性沉默/敲减OCT1基因的效果后,考察shRNA敲减OCT1的卵巢癌细胞株在体内转移能力的变化。结果通过IHC染色发现,OCT1在上皮性卵巢癌样本中存在高表达现象,尤其在透明细胞癌和浆液性卵巢癌中高表达现象较多。此外,通过Western blot对非肿瘤正常卵巢上皮细胞株HOSEpiC及卵巢癌上皮细胞株A2780、SKOV3和HO8910进行OCT1蛋白质含量检测发现,在SKOV3和HO8910细胞株中OCT1的含量较高,因此选用这两种细胞株作为体外实验对象进行研究。以上结果都表明,OCT1与上皮性卵巢癌可能存在相关性。通过逆转染siRNA敲减OCT1可以显著地抑制卵巢癌的迁移和侵润能力,且Western blot检测发现,敲减OCT1可以引起ZO-1蛋白的上调和Fibronectin、ERK等蛋白的下调;通过慢病毒过表达OCT1可以促进卵巢癌的迁移侵润能力,且可以引起ZO-1蛋白的下调和Fibronectin蛋白的上调。证明了OCT1可以调控卵巢癌的迁移侵润并参与调控EMT、迁移和侵润的相关信号通路。通过shRNA敲减OCT1可以抑制卵巢癌细胞株的迁移和侵润能力,并抑制小鼠肺转移模型中卵巢癌细胞的转移能力。证明了敲减OCT1可以抑制小鼠体内卵巢癌向肺转移的能力。结论本课题证实了OCT1和上皮性卵巢癌存在相关性,参与调控体外和体内的卵巢癌的迁移和侵润能力,并参与调控EMT及迁移侵润相关的多条信号通路。这些结果将有助于了解OCT1在卵巢癌中的生物学效应及其作用机制,并且OCT1很有希望被定义为全新的卵巢癌治疗的有潜力的靶标,为开发靶向治疗卵巢癌的药物提供新的依据,并运用于卵巢癌的临床诊断及治疗。

关键词：卵巢癌 OCT1 迁移侵润

桔梗根的水提取物对肿瘤侵润和转移的抑制作用

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中国实用医药 2012年第1期7卷 246-248页

作者：毕承华国药控股天津有限公司 300040

目的通过研究桔梗根水提取物对肿瘤细胞的影响机制,探讨对肿瘤侵润和转移的抑制作用。方法应用经改良的在Transwell细胞培养真空箱中进行的肿瘤细胞体外侵润分析法和实验性肺转移体内测定与自然杀伤细胞活性试验,进行统计学分析。结果... 详细信息

目的通过研究桔梗根水提取物对肿瘤细胞的影响机制,探讨对肿瘤侵润和转移的抑制作用。方法应用经改良的在Transwell细胞培养真空箱中进行的肿瘤细胞体外侵润分析法和实验性肺转移体内测定与自然杀伤细胞活性试验,进行统计学分析。结果桔梗根水提取物所含CK对侵润重建基底膜(基质胶)的B16-F10细胞有抑制作用。CK抑制B16-F10细胞侵润基质胶/纤维结合蛋白-包埋过滤膜的作用呈现浓度依赖方式。结论 CK在肿瘤细胞侵润方面的作用具有高侵润和转移能力,为改善肿瘤侵润和寻找转移治疗方法提供了参考。

关键词：桔梗根水提取物 CK 侵润转移抑制 NK

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口服鸦胆子乳并放化疗治疗胃恶性淋巴瘤广泛侵润一例

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中南医学科学杂志 1992年第4期 458-458页

作者：唐耀华吴美生杨立伍尤华衡阳医学院第一附属医院

胃恶性淋巴瘤的治疗以往是以手术为主的综合治疗,而我们采用非手术治疗方法,口服鸦胆子乳并放化疗治疗胃恶性淋巴瘤广泛侵润一例,获得完全缓解,有较长的无病生存期,现报道如下:患者,女,52岁,因上腹痛、呕吐二月余,于1990年7月2日入院,体... 详细信息

胃恶性淋巴瘤的治疗以往是以手术为主的综合治疗,而我们采用非手术治疗方法,口服鸦胆子乳并放化疗治疗胃恶性淋巴瘤广泛侵润一例,获得完全缓解,有较长的无病生存期,现报道如下:患者,女,52岁,因上腹痛、呕吐二月余,于1990年7月2日入院,体查:全身浅表淋巴结不肿大,剑下肌紧张,似能扪及肿块,其他未见异常。胃镜检查:胃

关键词：胃恶性淋巴瘤鸦胆子驱虫药(中药) 化疗治疗侵润

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切除甲状腺癌侵润的气管

国际肿瘤学杂志 1983年第2期10卷 117-118页

作者：唐克仇

当甲状腺癌侵及气管时,可在气管内形成肿瘤块并不断增大,最后因气道梗塞而导致死亡。与其他器官癌相比,甲状腺癌的临床过程通常是长的,其术后10年生存率也是相当高的。但是侵及气管的甲状腺癌预后并不乐观。根据作者对这类病人的经验,... 详细信息

当甲状腺癌侵及气管时,可在气管内形成肿瘤块并不断增大,最后因气道梗塞而导致死亡。与其他器官癌相比,甲状腺癌的临床过程通常是长的,其术后10年生存率也是相当高的。但是侵及气管的甲状腺癌预后并不乐观。根据作者对这类病人的经验,证明连同原发肿瘤环绕气管一起切除,可预防气道的梗阻。本文拟讨论甲状腺癌侵润气管的诊断及其外科处理。

关键词：甲状腺癌病人气管呼吸器官侵润

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颅内脑膜瘤侵润硬脑膜与脑膜尾征的形成机制

颅内脑膜瘤侵润硬脑膜与脑膜尾征的形成机制