VEGF、bFGF浓度梯度对猪血管内皮细胞、成纤维细胞增殖移行的影响

作     者：吕经纬 

作者单位：南京医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谭谦

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：VEGF bFGF 血管内皮细胞 成纤维细胞 浓度梯度 增殖 移行 

摘      要：目的创伤愈合学会对于慢性创面的定义是一个无法通过正常有序而及时的修复过程达到解剖和功能上的完整状态的创面。临床上多指各种原因形成的创面经1个月以上治疗未能愈合、也无愈合倾向者。导致慢性创面其主要原因有两个方面,第一是创面局部微循环紊乱,细胞自我修复创面能力减弱;第二是内源性生长因子水平显著降低。在所有的生长因子中,碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)起到了十分重要的作用。b FGF能够促进创面成纤维细胞的增殖、胶原的沉积,从而促进肉芽组织形成,加速创面愈合;VEGF能够增加创面局部的毛细血管密度,从而提高了创面的血流灌注及新陈代谢,最终促进创面愈合。有研究表明,角质形成细胞在表皮细胞生长因子浓度梯度诱导下,能够由低浓度向高浓度加速增殖移行。近年来,针对细胞生长因子浓度梯度诱导细胞加速增殖移行进而缩短创面愈合时间的研究,国内外鲜有报道。本文旨在利用细胞生长因子浓度梯度诱导技术,探讨成纤维细胞、血管内皮细胞能否在生长因子浓度梯度诱导下快速地由低浓度向高浓度增殖移行,为加速慢性创面的修复提供一定的理论基础。方法1.体外培养猪血管内皮细胞和成纤维细胞。2.用MTT法及细胞划痕实验检测不同浓度VEGF对血管内皮细胞增殖和移行的影响及不同浓度b FGF对成纤维细胞增殖和移行的影响。3.以浸泡法将VEGF和b FGF分别加载于胶原支架,用ELISA法通过标准曲线计算VEGF和b FGF于胶原支架的结合率和缓释性。4.筛选出在各时间点增殖和移行活性均有差异的不同浓度的VEGF或b FGF加载于胶原支架构成浓度梯度。5.血管内皮细胞与加载VEGF浓度梯度的圆形胶原支架共同培养,通过MTT法和测量细胞距中心点距离的差值检测血管内皮细胞增殖和迁移活力.6.成纤维细胞与加载b FGF浓度梯度的圆形胶原支架共同培养,通过MTT法和测量细胞距中心点距离的差值检测成纤维细胞增殖和迁移活力.结果1.在不同浓度VEGF刺激下,血管内皮细胞的增殖和迁移活性均受到影响,对两组数据分别进行单因素方差分析,筛选出5ng/ml,25ng/ml,100ng/ml三组,三组组间在各时间点增殖和迁移活力都有显著差异(P0.05)。2.在不同浓度b FGF刺激下,成纤维细胞的增殖和迁移活性均受到影响,对两组数据分别进行单因素方差分析,筛选出10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml三组,三组组间在各时间点增殖和迁移活力都有显著差异(P0.05)。3.VEGF与胶原支架结合率为42.35%,b FGF与胶原膜片结合率为38.23%,且有一定的缓释性。4.VEGF浓度梯度组(5ng/ml,25ng/ml,100ng/ml)与VEGF单一浓度组相比较,对血管内皮细胞的增殖活性没有显著影响,而对血管内皮细胞的迁移活性有显著影响(P0.05)。5.b FGF浓度梯度组(10ng/ml,50ng/ml,100ng/ml)与b FGF单一浓度组相比较,对成纤维细胞的增殖活性没有显著影响,而对成纤维细胞的迁移活性有显著影响(P0.05)。结论在一定浓度下,VEGF对血管内皮细胞的增殖和移行活性有促进作用,VEGF浓度梯度对于血管内皮细胞迁移活性的促进作用强于单一浓度VEGF。同样,在一定浓度下b FGF对成纤维细胞的增殖和移行活性有促进作用,b FGF浓度梯度对于成纤维迁移活性的促进作用强于单一浓度b FGF。