苯酚降解细菌GXP04及其苯酚羟化酶基因的研究

作     者：吴培诚 

作者单位：广西大学 

学位级别：硕士

导师姓名：武波

授予年度：2002年

学科分类：07[理学] 09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 0713[理学-生态学] 

主      题：苯酚 生物降解 降解基因 苯酚羟化酶基因 琼氏不动杆菌 

摘      要：苯酚是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药、医药合成等行业生产的原料或中间体。随着经济的发展，未经处理的含酚废水对人类的生存环境已经造成了严重的威胁。利用微生物降解的方法处理含酚废水是一种经济有效且无二次污染的方法。 本研究利用传统微生物学的方法，从南宁市郊被含酚废水污染的土样中筛选到一株高效的苯酚降解细菌GXP04，能够在以苯酚为唯一碳源和能源的无机培养基上生长，通过形态观察及16SrRNA编码序列同源性比较分析，我们初步鉴定该菌株为琼氏不动杆菌。通过对GXP04菌株在不同温度、pH值，以及培养基中不同苯酚浓度条件下的生长和降解苯酚的情况，我们初步确定了GXP04的最适生长和降解苯酚的温度为34℃，最适pH值为7.0，苯酚最高的耐受浓度为800mg／L． 根据苯酚羟化酶所共有的保守序列设计合成了一对引物，以GXP04总DNA为模板，通过PCR反应，扩增出683bp的同源片段。对该DNA序列测序，并通过序列分析表明，该片段与已报道的醋酸不动杆菌苯酚羟化酶有84％的同源性。以此DNA片段为探针，通过Southern blot的方法，从用不同酶切的GXP04总DNA中获得阳性印迹，确认其苯酚羟化酶基因的位置，进而构建了GXP04苯酚羟化酶的部分文库。通过菌落原位杂交，找到一个含有苯酚羟化酶基因的阳性克隆，为进一步研究苯酚羟化酶和构建高效苯酚降解基因工程菌打下基础。