液相微萃取在中药呋喃香豆素成分分析及药物蛋白结合参数测定中的应用

作     者：张彦杰 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：白小红

授予年度：2010年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：中空纤维液相微萃取 分散液相微萃取 高效液相色谱法 呋喃香豆素 蛋白结合 中药 Klotz方程 

摘      要：目的以4种呋喃香豆素化合物为萃取对象,探讨中空纤维液相微萃取(HFLPME)和分散液相微萃取(DLLME)两种样品前处理方法的萃取机理;并与高效液相色谱(HPLC)结合对两种萃取方式进行可行性比较。 方法对HFLPME和DLLME实验条件包括中空纤维种类、萃取溶剂、溶剂体积、萃取时间、搅拌速度等进行优化,比较二者的萃取效果和萃取时间、净化、准确度和可操控性等。 结果在优化的实验条件下,用HFLPME/HPLC和DLLME/HPLC对4种呋喃香豆素化合物(补骨脂素、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素)进行测定。富集倍数分别在12.2-18.5倍和11.6-21.6倍,检测限分别在1.2-5.0μg/L和1.0-3.0μg/L,RSD均小于6.2%。两种方法对4种呋喃香豆素化合物的萃取效果没有显著的不同。 结论两种萃取方式的富集倍数、准确度和精密度均好,对弱极性化合物有良好的萃取效率等。两种萃取方式的不同在于HFLPME容易操作,比较稳定;DLLME耗时较短,无需专门的萃取材料;与HFLPME相比,DLLME萃取时间极短,适用于实验室中批处理样品;而HFLPME由于中空纤维的化学结构对化合物的选择性,使HFLPME对复杂基质样品的净化能力强;测定补骨脂素和氧化前胡素的线性范围较DLLME宽,而异欧前胡素的线性范围较之窄;HFLPME和DLLME分析中药中4种化合物的平均回收率分别在90.8%-106.5%和97.2.1%-106.1%;两种萃取方法获得较高的富集倍数,检测出了中药白芷及其制剂中微量成分补骨脂素。 目的建立中空纤维液相微萃取(HFLPME)-高效液相色谱法(HPLC)测定中药中4种呋喃香豆素类化合物(补骨脂素、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素)在牛血清白蛋白(BSA)中的总浓度及游离药物浓度的测定方法,分别计算出了4种成分与BSA的结合率,并利用Klotz方程计算出各自的结合参数。 方法利用中空纤维液相微萃取装置,分别取作为供相的样品溶液(蛋白溶液与空白溶液)于2 mL的玻璃管中,将注满接受相(正庚醇)的中空纤维管放置于样品溶液中,在转速1800rpm下萃取60min,收集接受相,高效液相色谱仪分析。 结果利用中空纤维液相微萃取法直接测定4种药物的蛋白结合率,结果表明两种或以上药物与蛋白作用时,相互之间的蛋白结合率没有影响。补骨脂素、氧化前胡素、欧前胡素、异欧前胡素与蛋白的结合率分别为58%-62%,18%-21%,27%-33%和40%-48%,结果表明补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素三者的蛋白结合率均较高,而氧化前胡素的蛋白结合率较低。4种药物成分与BSA的结合常数分别为1801、212、937.3、4025M-1,结合位点数分别为1.2、1.6、0.6和0.3。 结论本方法可以作为测定游离药物浓度,研究药物与蛋白结合的一种简单、快速、有效的方法。