丹参注射液对新生鼠肾积水病肾损害的保护研究

作     者：张伟同 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：马洪

授予年度：2012年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：动物/Wistar鼠 肾积水 转化生长因子-β1 

摘      要：目的：探讨丹参注射液对新生鼠肾积水病肾的损害有否保护作用,以便为临床更好地治疗先天性肾积水患儿,提供可靠的实验与理论依据。 方法：1、动物模型的建立选用生后48h内的wistar鼠120只,随机分为5组,每组24只。随机选择1组行假手术,术后第3周开始以2.0m1·kg-1·d-1生理盐水腹腔注射,建立对照组;余4组随机分为模型组、低剂量丹参组(干预1组)、中剂量丹参组(干预2组)和高剂量丹参组(干预3组)。实验组均采用腰大肌压迫左侧上段输尿管,制作左侧输尿管不全梗阻实验模型,模型组、干预1组、干预2组、干预3组术后第3周开始分别以2.0m1·kg-1·d-1的生理盐水、混合液1(丹参注射液与生理盐水之比为1：3)、混合液2(丹参注射液与生理盐水之比为1：1)、丹参注射液进行腹腔注射;各组动物再随机分为三个亚组,分别在饲养5周、7周和10周时每组动物随机选取1个亚组处死,切取肾组织和收集尿液标本待检。 2、各种指标的检测(1)、采集各组不同时期(不全梗阻模型建立干预5周、7周和10周)的病肾组织标本,进行HE染色光镜检查,以及应用透射电镜技术观察其超微结构的变化;(2)、采集不同时期的病肾组织,通过免疫组织化学PV法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,应用Image-ProPlus图像分析软件测量平均光密度值;通过RT-PCR技术检测病肾组织内TGF-β1mRNA水平的变化;(3)、收集各组不同时期的病肾肾盂尿,应用ELISA法检测尿TGF-β1的水平。 结果：1、动物模型建立期间,动物的存活情况：新生鼠共120只,建立肾积水梗阻模型及喂养期间死亡7只(麻醉致死1只、术中死亡4只、喂养期间死亡2只),存活113只(94.17%)。 2、病肾组织形态学的变化： (1)、肉眼观及光镜下病肾组织结构的变化：对照组不同喂养时期,肉眼观双肾大小、形态一致,双肾肾小球、肾小管发育正常,肾小球饱满,肾小囊未见扩张;模型组随喂养时期的延长,病肾较健肾逐渐增大,肾盂扩张、积水,病肾肾小球结构形态异常,肾小球鲍曼氏囊扩张,肾小管扩张。同一干预组随喂养时间的延长,肉眼观病肾仍大于健肾,镜下肾小球、肾小管的损害随时间延长呈加重趋势,但病理分级明显低于模型组(P0.05);同一喂养时间点随丹参剂量的增大,TGF-β1的表达量呈逐渐降低趋势,但高于对照组。对照组、模型组与各干预组间比较,差异均有统计学意义(P0.05),余各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05),余各时间点间比较,差异有统计学意义(P0.05),梗阻建立7周、10周时尿TGF-β1水平组间比较,差异均有统计学意义(P0.05)。 结论：1、丹参注射液可阻止或减低新生鼠肾积水病肾的损害,具有保护效应。 2、通过检测新生鼠肾积水病肾组织及病肾尿液中TGF-β1的水平表明：丹参注射液对新生鼠肾积水病肾损害的保护呈时间-量效依赖关系。推测临床上应用丹参注射液可能对小儿肾积水的病肾损害也有保护作用。