黄瓜生长素受体同源基因的克隆及其遗传转化

作     者：鲍林文 

作者单位：杭州师范大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王利琳;陈哲皓

授予年度：2013年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0902[农学-园艺学] 090102[农学-作物遗传育种] 090202[农学-蔬菜学] 

主      题：黄瓜 生长素受体 基因克隆 RNA干涉 瞬时转化 

摘      要：黄瓜(Cucumis sativus L.)是一种重要的园艺和经济作物,更是植物分子生物学研究的好材料,它不需要特别的光周期诱导就能自主开花,营养生长期也很短。黄瓜的全基因组序列测定已由我国科学家于2009年完成(Huang et al.,2009),但目前尚未有关于黄瓜中生长素受体的克隆、表达模式分析及其调控机制和生物学功能的研究报道,基于此本论文开展了相关的实验,所取得主要研究成果如下： 1、克隆了黄瓜中生长素受体的同源基因CsTIR和CsAFB,构建了过量表达载体35S:CsTIR和35S:CsAFB;同时构建了相应的RNA干涉载体CsTIR-RNAi和CsAFB-RNAi。 2、通过烟草叶片瞬时转化实验,证明构建的RNA干涉载体可以抑制目的基因的表达,起到干涉的效果。 3、建立了高效的黄瓜离体再生体系：以6天苗龄的黄瓜子叶节作为外植体,MS+0.5mg/L6-BA+2.0mg/L AgNO3再生培养25天后可以得到大量不定芽。 4、确定了黄瓜转基因抗性芽潮霉素筛选的浓度为10mg/L。 5、通过半定量RT-PCR鉴定了黄瓜不同组织中内源CsTIR和CsAFB基因的表达量。10天幼苗中,CsAFB和CsAFB基因的表达量都在根和叶中较高,茎中相对较少;幼苗的茎中几乎检测不到CsTJR的表达;70天成年黄瓜各组织都有CsTIR和CsAFB的表达,其中CsAFB基因在不同组织中的表达量比较一致,而CsTIR.基因在营养器官茎、叶和卷须中的表达量略高于在花芽和花中的表达量。 6、将35S:CsTIR(?)和35S:CsAFB遗传转化模式植物拟南芥,已得到35S:CsTIR T2代纯合体,和35S:CsAFBT1代转基因抗性苗。