激动型CD40单克隆抗体体外抑制结肠癌细胞增殖的实验研究

作     者：崔建功 

作者单位：天津医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李卫东

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肿瘤免疫 CD40 激动型抗体 树突状细胞 结肠癌 

摘      要：目的:探讨激动型CD40单克隆抗体（CD40 monoclonal antibody,CD40m Ab）体外对负载肿瘤抗原的树突状细胞（dendritic cells,DCs）激活情况,进而研究DCs诱导活化的肿瘤特异性效应T淋巴细胞对人结肠癌细胞HCT116增殖的抑制作用。方法:应用反复冻融法制备肿瘤抗原,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMCs）,贴壁培养分离DCs前体细胞和T淋巴细胞,体外rh GM-CSF和rh IL-4联合诱导DCs前体细胞定向分化成未成熟的DCs后予肿瘤抗原负载,在不同条件下激活促进其成熟,不同实验条件分组为:空白阴性对照组、阳性对照TNF-α组和激动型CD40m Ab组,不同条件处理后应用流式细胞仪检测激活后各组DCs表面分子表达情况,ELISA检测各组细胞培养液上清中细胞因子IL-12（p70）分泌情况;进而将各组DCs分别与T淋巴细胞混合培养,诱导产生肿瘤特异性效应T淋巴细胞,MTT法检测DCs诱导T淋巴细胞分化增殖能力;将不同条件诱导产生的肿瘤特异性效应T淋巴细胞分别与结肠癌细胞HCT116混合培养,MTT法检测效应T淋巴细胞对HCT116细胞增殖的抑制作用。结果:成功制备可溶性肿瘤冻融抗原,浓度为2.01mg/ml;从PBMCs中可以分离获得DCs前体细胞和T淋巴细胞;激动型CD40m Ab激活的负载肿瘤抗原DCs表面分子CD80（92.5%±6.7%）、CD83（22.4%±5.3%）、CD86（81.3%±7.5%）和HLA-DR（87.8%±3.7%）的表达率及细胞培养液上清中IL-12（p70）分泌浓度（716.80±53.43pg/ml）明显高于空白阴性对照组,差异具有统计学意义（P0.05）,与阳性对照TNF-α组相比无明显差异（P0.05）;激动型CD40m Ab组DCs诱导T淋巴细胞分化增殖后测得刺激指数（SI）为2.0062±0.4383显著高于空白阴性对照组（1.3650±0.2098）,差异具有统计学意义（P0.05）,与阳性对照TNF-α组（1.9778±0.3704）相比无明显差异（P0.05）;激动型CD40m Ab激活的DCs所诱导的效应T淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤率为66.08%±0.41%,明显高于空白阴性对照组（46.60%±1.10%）,差异具有统计学意义（P0.05）,与阳性对照TNF-α组（66.21%±1.73%）相比无明显差异（P0.05）。结论:1、激动型CD40m Ab在体外可以更好的激活负载肿瘤抗原的DCs并促进其成熟。2、激动型CD40m Ab激活的DCs能够显著增强T淋巴细胞分化增殖活性并诱导活化肿瘤特异性效应T淋巴细胞。3、激动型CD40m Ab激活的DCs诱导活化的肿瘤特异性效应T淋巴细胞在体外对结肠癌细胞增殖具有显著的抑制作用。