消癌平注射液及其与奥沙利铂联合抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的研究

作     者：濮忠建 

作者单位：南京中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：华海清

授予年度：2011年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：消癌平 奥沙利铂 原发性肝癌 HepG-2细胞 细胞增殖 细胞凋亡 

摘      要：目的：通过体外实验观察中药消癌平注射液及其与第3代铂类化疗药物奥沙利铂联合作用对人肝癌细胞株的作用,并探讨其可能的机制,为中药与化疗药物联合应用提供理论依据。 方法：将不同浓度的消癌平、奥沙利铂单药及两药联合作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG-2,采用不同的实验方法观察细胞株的生长状况： (1)增殖抑制实验：通过MTT法观察消癌平单药及联合奥沙利铂后对HepG-2细胞增殖的影响;(2)倒置显微镜观察细胞形态学变化;(3)原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡时细胞核着色情况;(4)荧光显微镜下观察凋亡细胞形态改变;(5)流式细胞术检测细胞周期分布及早期凋亡;(6)免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Survivin、Bcl-2的表达。 结果：(1)消癌平与奥沙利铂对肝癌HepG-2细胞增殖均有抑制作用,且该抑制作用呈现时间、剂量依赖性,17.5μl/ml消癌平与0.5μg/ml奥沙利铂联合作用48h后表现为相加作用;(2)倒置显微镜下观察可见经消癌平及奥沙利铂单药作用后细胞出现不同程度的变小、变圆,细胞间接触变松,两药联合作用后上述表现更为明显,差异有统计学意义;(3) TUNEL法检测到,阴性对照组细胞核呈淡紫色,阳性对照组细胞核呈深褐色,经消癌平作用后,凋亡细胞的细胞核呈深褐色,且联合奥沙利铂后呈细胞核深褐色的细胞明显增多,差异有统计学意义;(4)荧光显微镜下可见凋亡细胞,联合奥沙利铂时凋亡细胞比例明显升高(P0.001);(5)流式细胞术检测发现消癌平能阻滞细胞于Go/G1期,联合奥沙利铂后阻滞细胞于S期,消癌平可促进HepG-2细胞凋亡,联合奥沙利铂时细胞凋亡更为明显(P0.05);(6)免疫组化结果显示,经消癌平作用后,HepG-2细胞Caspase-3蛋白的表达比阴性对照组显著增强(P0.01),Survivin、Bcl-2蛋白表达比阴性对照组显著减弱(P0.01),两药联合时上述作用表现得更为明显(P0.01)。 结论：消癌平能抑制HepG-2细胞的增殖,其机制可能是通过将细胞阻滞于Go/G1期,上调Caspase-3蛋白的表达、下调Survivin和Bcl-2蛋白的表达而诱导细胞凋亡来实现的。当消癌平与第3代铂类化疗药物奥沙利铂合用时,可显示出良好的相加作用。本研究为探索中西医结合治疗肝癌的优化方案提供了实验依据,具有一定的理论意义与临床指导价值。