脂肪乳逆转布比卡因心脏毒性的作用研究

作     者：摆志霞 

作者单位：宁夏医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈学新

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100217[医学-麻醉学] 10[医学] 

主      题：脂肪乳 布比卡因 肾上腺素 心肌细胞 凋亡 

摘      要：布比卡因是临床上常用的脂溶性酰胺类长效局麻药，在临床上广泛用于外周神经阻滞、硬脊膜外阻滞和蛛网膜下腔阻滞，如果误入静脉或剂量过大，则可导致严重的心血管毒性反应。由于缺乏特异性的拮抗药物，临床处理以对症治疗为主要方法，近几年来，无论从动物实验还是临床个案报道都显示脂肪乳在救治局麻药心脏毒性时效果确切，尤其是对脂溶性药物布比卡因的解毒效果甚为明显。肾上腺素作为心肺复苏时的一线用药，也被认为是在救治布比卡因心脏毒性时的有效药物。然而，在救治布比卡因心脏毒性时肾上腺素的效果是否优于脂肪乳还需实验进行说明。基于此我们首先设计实验观察脂肪乳在逆转布比卡因心脏毒性时其效果是否优于脂肪乳联合肾上腺素的作用。由于目前对脂肪乳救治布比卡因心脏毒性机制不清，为其能安全广泛地应用于临床上，我们有必要研究清楚其作用机制。实验二拟以H9C2心肌细胞为研究对象，观察脂肪乳对布比卡因作用的H9C2心肌细胞凋亡的影响，从脂肪乳抑制心肌细胞凋亡角度初探其逆转布比卡因心脏毒性的作用机制。 实验一评价脂肪乳在逆转布比卡因心脏毒性时的疗效 目的观察脂肪乳（lipid emulsion, LE）以及LE联合肾上腺素（Epinephrine, EPI）在救治布比卡因（Bupivacaine, BPV）所致家犬心脏毒性时的疗效。 方法健康成年家犬21只，分为3组，每组7只：生理盐水（Saline）组（A组），20%LE组（B组），20%LE+EPI（C组）。0.75%布比卡因10mg Kg-1经股静脉匀速推注，待MAP降至基础值的50%及ECG出现宽大畸形QRS波时行心肺复苏（CPR），同时分别给予A组生理盐水4ml/kg，B组20%LE4ml/kg，C组20%LE4ml/kg+EPI10μg/kg。持续监测血压及心率，记录不同时间点自主循环恢复（ROSC）的家犬数量及MAP、HR、心电图PR间期、QRS间期及QT间期的变化。 结果：在救治第10min时，B组ROSC数量略多于A组和C组，但差异无统计学意义，在第15和第20min时明显多于Ａ组和C组（P0.05）。 B组家犬在第20min时MAP明显高于A组和Ｃ组（P0.05或P0.01），HR明显快于Ａ组和C组（P0.05或P0.01），PR间期、QRS间期、QT间期明显短于Ａ组和C组（P0.05或P0.01）。 结论：成功建立布比卡因心脏毒性的模型，20%脂肪乳救治能明显提高家犬的生存率，且救治后的血流动力学指标明显优于20%脂肪乳联合肾上腺素10μg Kg-1的效果。 实验二脂肪乳对布比卡因致H9C2心肌细胞凋亡的影响 目的观察脂肪乳（Lipid emulsion，LE）对布比卡因（Bupivacaine，BPV）诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响。 方法分组一：对照组、脂肪乳剂组（LE浓度分别为0.25%、0.5%、1%和2%）及布比卡因组（BPV浓度为0.38、0.54、0.77和1.54mM）培养24h后观察H9C2的存活率（MTT法），得到LE诱导的心肌细胞最佳增殖浓度以及BPV诱导心肌细胞凋亡的半数抑制浓度。分组二：对照组、LE（1%）组、1.54mMBPV及LE（1%）联合BPV浓度为1.54mM在不同时间点（6h、12h及24h）细胞的存活率，并通过Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察其凋亡情况，最后用流式细胞仪检测细胞的凋亡程度。 结果：布比卡因不同浓度对大鼠H9C2心肌细胞均显示出不同程度的细胞毒性作用，作用24h后1.54mM的BPV能使大多数细胞凋亡或死亡，而脂肪乳对H9C2心肌细胞生长无抑制作用，并在浓度为1%时其生长状态略优于0.25%、0.5%及2%的浓度。Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察发现1%LE能明显抑制布比卡因浓度为1.54mM所致的心肌细胞凋亡现象，进一步经流式细胞仪检测1%LE减少由布比卡因所诱导的细胞凋亡（P0.05），差异有统计学意义。 结论：脂肪乳能明显减少由布比卡因诱导的H9C2心肌细胞凋亡，且干预时间越早，其心肌细胞保护效应越明显。