信号放大方法在细胞中生物活性小分子检测中的应用研究

作     者：孙晓丰 

作者单位：青岛科技大学 

学位级别：硕士

导师姓名：胡孔诚;郭英姝

授予年度：2014年

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 

主      题：硫化镉纳米粒子 滚环复制放大 DNA酶 三磷酸腺苷 还原型巯基化合物 

摘      要：第一章，对相关肿瘤的内容进行了介绍，包括其形成的原因，对人的危害，以及对其并生的肿瘤标志物作了详细说明，并介绍了各种用于进行化学分析的方法，例如化学发光、荧光等方法，对其基本原理作了简要说明，并指出了这些方法常用于哪些检测方面，对当前我们的检测水平作了一定程度的概要以及对将来的发展前景作了简略展望。 第二章，本章设计了含有三磷酸腺苷(ATP)适体的DNA1分子，与ATP特异性结合后，构型发生变化，在连接酶E.coli的作用下，不需要连接DNA就能够成环，触发滚环复制放大(Rolling Cycle Amplification, RCA)。在三磷酸腺苷硫酸化酶的催化下，RCA的产物焦磷酸盐与5’磷酸化硫酸腺苷反应生成ATP。通过ATP的循环再生放大信号，硝酸溶解硫化镉纳米粒子，电化学检测ATP到1.0×10-10M。并且，本法对K562细胞及人血清中ATP的检测表现出来令人满意的回收率。 第三章，本章设计了一种含有荧光基团与猝灭剂的颈环分子信标(MB)，在DNA酶作用下，发生解环反应，在剪切酶的作用下，荧光基团与猝灭剂分离，释放出荧光信号。在优化条件下，可检测到1.0×10-8M ATP以及8.0×10-9MGSH。并且在K562细胞中的回收率也令人满意。