miRNA34a对骨肉瘤DNMT1基因表达的调控研究

作     者：王鹏 

作者单位：宁夏医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：施建党

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：mi RNA34a 骨肉瘤 DNMT1 基因治疗 细胞增殖和凋亡 

摘      要：目的:通过研究上调骨肉瘤细胞株MG-63中的mi RNA34a表达水平,探究其对下游的靶基因-DNA甲基转移酶1基因(DNMT1)及其骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响,为骨肉瘤生物学基因靶向治疗开辟新思路和奠定实验基础。方法:实验分为三组:A组:空白组(未处理组);B组:阴性对照组(转染阴性质粒);C组:实验组(转染组)。利用慢病毒构建能够稳定表达mi RNA34a的转染质粒:pc DNA3.1/pri-mi RNA34a,成功转染实验组骨肉瘤细胞株,培养生长良好并能稳定表达的细胞株。同样,利用慢病毒阴性质粒(pc DNA3.1)处理阴性对照组。空白组细胞株不予以处理。采用实时荧光定量PCR,检测转染前后三组细胞中DNMT1m RNA变化情况。Western Blot法检测转染前后三组细胞蛋白表达水平的变化。利用流式细胞术法对细胞周期变化、细胞增殖以及细胞凋亡情况进行检测并分析。结果:转染满意后,对三组细胞株的实验数据进行比对分析。在实验组中的DNMT1 m RNA相对表达水平(0.26±0.04)显著低于阴性对照组(1.02±0.15)和空白对照组(1.05±0.06),差异具有统计学意义(P0.05);实验组中的DNMT1蛋白表达量较对照组明显下降(P0.05);骨肉瘤细胞的增殖受到抑制,实验组转染后第5天增殖抑制率达28.2±1.69%;实验组细胞在G0/G1期的细胞比率高达71.58±0.96%,显著高于空白对照组(62.99±0.67%)和阴性对照组(63.54±1.33%)(P0.05);细胞凋亡明显增强,实验组细胞的凋亡率为28.20%,显著高于空白对照组(5.06%)和阴性对照组(5.34%)的细胞凋亡率(P0.05)。结论:骨肉瘤MG-63细胞株转染pc DNA3.1/pri-mi RNA34a质粒后,增强了mi RNA34a的表达,降低了下游DNMT1基因m RNA及蛋白的表达水平,促进了骨肉瘤细胞凋亡,对骨肉瘤细胞的增殖产生了抑制作用。mi RNA34a为骨肉瘤在分子生物学领域的基因靶向诊疗开辟了新思路。